玻璃酸酶(mei)測定(ding)法

試劑

（1） 醋酸(suan)-醋酸(suan)鉀(jia)緩沖液(ye) 取醋酸(suan)鉀(jia) 14g，冰(bing)醋酸(suan) 20.5ml，再加水(shui)稀釋至 1000ml。

（2） 磷酸(suan)鹽緩沖液 取磷酸(suan)二氫(qing)鈉(na) 2.5g、無水磷酸(suan)氫(qing)二鈉(na) 1.0g 與氯化鈉(na) 8.2g，加水溶解至 1000mL。

（3） 水解(jie)明(ming)膠(jiao) 取明(ming)膠(jiao) 50g，加(jia)水 1000ml，在 121℃加(jia)熱 90 分鐘，然(ran)后冷凍干(gan)燥。

（4） 水解明膠稀(xi)釋液(ye)(ye) 取(qu)磷酸(suan)鹽緩(huan)沖(chong)液(ye)(ye)與(yu)水各(ge) 250ml，加水解明膠 330mg，搖(yao)勻，在(zai) 0～4℃保存。如溶液(ye)(ye)不(bu)發生(sheng)渾濁(zhuo)，可繼(ji)續使用。

（5） 血清貯備液(ye) 取新(xin)鮮牛血清或凍干牛血清（先(xian)用水溶(rong)解并稀釋(shi)至標示量體積）1份(fen)，加醋(cu)酸-醋(cu)酸鉀緩沖液(ye) 9 份(fen)稀釋(shi)，再以 4mol/L 鹽酸溶(rong)液(ye)調節 pH 值至 3.1，放置 18～24小時后再用。在(zai) 0～4℃保存，可(ke)應用 30 日。

（6） 血清(qing)溶液  血清(qing)貯備液中(zhong)血清(qing)總固體(ti)(ti)（取牛血清(qing)適量，置裝(zhuang)有(you)潔凈砂粒并在(zai) 105℃干(gan)燥至恒重的坩(gan)堝中(zhong)，置水浴上蒸干(gan)后，再在(zai) 105℃干(gan)燥至恒重）在(zai) 8%左右者，取 1 份(fen)(fen)，用(yong)(yong)醋酸(suan)-醋酸(suan)鉀(jia)緩(huan)(huan)沖(chong)液 3 份(fen)(fen)稀釋；血清(qing)總固體(ti)(ti)在(zai) 5%左右者，取 1 份(fen)(fen)，用(yong)(yong)醋酸(suan)-醋酸(suan)鉀(jia)緩(huan)(huan)沖(chong)液 2份(fen)(fen)稀釋。臨用(yong)(yong)時制(zhi)備。

（7） 玻璃酸鉀貯(zhu)備液(ye) 取預先經五氧化二磷減(jian)壓(ya)干燥 48 小時的玻璃酸鉀，加(jia)水制(zhi)成每 1ml 中含 0.5mg 的溶液(ye)。在(zai) 0℃以下保存(cun)，可應用(yong) 30 日。

（8） 玻璃酸鉀溶液(ye)(ye) 取玻璃酸鉀貯備液(ye)(ye) 1 份(fen)，用磷酸鹽緩沖液(ye)(ye) 1 份(fen)稀釋。臨用時制備。

標準品溶液的制備 精密稱取玻璃酸酶標準品適(shi)量(liang)，加冷的水解(jie)明膠稀釋液(ye)制成每1ml 中含 1.5 單位的溶液(ye)。臨用時制備(bei)。

供試品溶(rong)液的制(zhi)備 按(an)供試(shi)品的(de)標示量(liang)或估計效價精密稱取供試(shi)品適(shi)量(liang)，加(jia)冷的(de)水(shui)解明膠(jiao)稀釋液(ye)制成每 1ml 中含(han)約 1.5 單位(wei)的(de)溶液(ye)。臨用時制備。

標(biao)準曲(qu)線的(de)制備 取大小相(xiang)同(tong)的試管(guan) 12 支，按順序加入(ru)標準(zhun)品(pin)溶液 0.00ml、0.10ml、 0.20ml、0.30ml、0.40ml 與 0.50ml，各(ge) 2 支；再依次相(xiang)應加入(ru)水解明膠稀釋液 0.50ml、0.40ml、0.30ml、0.20ml、0.10ml 與 0.00ml，每(mei)(mei)隔 30 秒順序加入(ru)玻璃酸鉀溶液 0.50ml，使(shi)每(mei)(mei)一(yi)管(guan)的總體積為 1.00ml，搖勻(yun)，置 37℃±0.5℃水浴中；每(mei)(mei)管(guan)準(zhun)確保溫 30 分鐘后，每(mei)(mei)間隔 30 秒鐘

順(shun)序取(qu)出，立(li)即順(shun)序加(jia)入血清溶(rong)液 4.0ml，搖(yao)(yao)勻，在(zai)室(shi)溫放(fang)置 30 分(fen)鐘，搖(yao)(yao)勻，在(zai) 640nm 的(de)波長處測(ce)定吸光度(du)；同時以(yi)磷酸鹽(yan)緩沖液 0.50ml 代替(ti)玻璃酸鉀溶(rong)液，加(jia)水解明膠稀釋(shi)液 0.50ml，搖(yao)(yao)勻，按(an)上述方(fang)法自“置 37℃±0.5℃的(de)水浴中(zhong)"起同法操作，作為(wei)空(kong)白。以(yi)吸光度(du)為(wei)縱坐標(biao)(biao)，標(biao)(biao)準(zhun)品溶(rong)液的(de)效價（單位）為(wei)橫坐標(biao)(biao)繪(hui)制標(biao)(biao)準(zhun)曲線。

測定法(fa) 取大小相同的(de)(de)試管 6 支(zhi)，依(yi)次(ci)加供(gong)試品(pin)溶液(ye)(ye) 0.20ml、0.30ml 與 0.40ml，各 2支(zhi)；再依(yi)次(ci)相應加入水解明膠(jiao)液(ye)(ye) 0.30ml、0.20ml 與 0.10ml，照標準曲線(xian)的(de)(de)制備項下， 自“每隔 30 秒順序(xu)加入玻(bo)璃(li)酸鉀(jia)溶液(ye)(ye) 0.50ml"起，依(yi)法(fa)測定，自標準曲線(xian)上查得效價(jia)（單位）后，分別除以供(gong)試品(pin)的(de)(de)重量（mg），算出 6 份供(gong)試品(pin)的(de)(de)平均數，即(ji)為玻(bo)璃(li)酸酶的(de)(de)效價(jia)（單位）。