產(chan)品名稱(cheng)：大鼠白細胞介素1β（IL-1β）ELISA試劑盒

英文名(ming)稱(cheng)：Rat IL-1β ELISA Ki Instruction

規(gui)格：48T/96T

有效期：6個月

保存條件：2-8℃

用(yong)途：

本(ben)試劑(ji)盒用于體(ti)外(wai)定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體(ti)樣本(ben)中(zhong)大鼠白細胞介素(su)1β（IL-1β）的含量。

檢測原理

試劑盒(he)采用雙抗體一步夾心(xin)法(fa)酶聯免疫吸(xi)附試驗（ELISA）。往(wang)預先包被大鼠白(bai)細胞介(jie)素1β（IL-1β）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入(ru)標本、標準品、HRP標記的檢測(ce)抗體，經過溫(wen)育并徹-底洗滌(di)。用底物(wu)TMB顯色(se)(se)，TMB在過氧化(hua)物(wu)酶的(de)催化(hua)下轉(zhuan)化(hua)成(cheng)藍色(se)(se)，并(bing)在酸的(de)作用下轉(zhuan)化(hua)成(cheng)最終的(de)黃(huang)色(se)(se)。顏色(se)(se)的(de)深淺和(he)樣(yang)品(pin)中的(de)大(da)鼠白細胞(bao)介素1β（IL-1β）呈正相關。用酶標儀(yi)在450nm 波長下測定吸光度(du)（OD 值），計算樣(yang)品(pin)濃度(du)。

樣品收集、處理及保存(cun)方法

以下只是列出樣品(pin)采(cai)集(ji)的一般指(zhi)南。所有樣本采(cai)集(ji)過程中，不得(de)使用疊氮鈉(na)做為(wei)防腐(fu)劑。

1.  血清(qing)：使(shi)用不含熱原和內毒(du)素的(de)試管，操作過程(cheng)中避(bi)免任(ren)何(he)細胞刺(ci)激(ji)，將收集(ji)于血清(qing)分離管的(de)全血標本在室(shi)溫(wen)放置2小時或(huo)4℃過夜，然(ran)后1000×g離心20 分鐘，取上(shang)清(qing)即可(ke)，或(huo)將上(shang)清(qing)置于-20℃或(huo)-80℃保存，但(dan)應避(bi)免反復凍(dong)融(rong)。

2.  血(xue)漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分(fen)鐘內(nei)于2-8℃ 1000×g離心15分(fen)鐘，取上(shang)清即(ji)可檢測(ce)，或將上(shang)清置于-20℃或-80℃保存，但應(ying)避免反復凍融。

3.  細胞培養物上清或其它生物標本(ben)：請1000×g離心20分(fen)鐘(zhong)，取上清即可(ke)檢測(ce)，或將(jiang)上清置于-20℃或-80℃保(bao)存，但應避免反復凍(dong)融(rong)。

4.  組(zu)(zu)(zu)織(zhi)(zhi)勻漿：用預冷的(de)(de)PBS (0.01M, pH=7.4)沖(chong)洗組(zu)(zu)(zu)織(zhi)(zhi)，去除殘留(liu)血液(ye)（勻漿中(zhong)裂(lie)(lie)解(jie)的(de)(de)紅細(xi)胞會影響測(ce)量結果(guo)），稱重后(hou)(hou)將組(zu)(zu)(zu)織(zhi)(zhi)。剪碎(sui)。將剪碎(sui)的(de)(de)組(zu)(zu)(zu)織(zhi)(zhi)與對應體積的(de)(de)PBS（一(yi)(yi)般按(an)1:9的(de)(de)重量體積比，比如1g的(de)(de)組(zu)(zu)(zu)織(zhi)(zhi)樣品(pin)對應9mL的(de)(de)PBS，具(ju)體體積可根據實(shi)驗需(xu)要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中(zhong)加(jia)入蛋白酶抑制(zhi)劑）加(jia)入玻璃勻漿器(qi)中(zhong)，于冰上充分研磨。為了進一(yi)(yi)步(bu)裂(lie)(lie)解(jie)組(zu)(zu)(zu)織(zhi)(zhi)細(xi)胞，可以對勻漿液(ye)進行超聲破碎(sui)，或反復凍融。最后(hou)(hou)將勻漿液(ye)于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測(ce)。

注：標(biao)本(ben)溶血會影響(xiang)最后檢測(ce)結果，因此(ci)溶血標(biao)本(ben)不宜進行此(ci)項(xiang)檢測(ce)。

5.  保(bao)存：如果樣本收集(ji)后不及時檢測，請按(an)一次用(yong)量分(fen)裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在(zai)室溫下解(jie)凍并確(que)保樣品均勻地充分(fen)解(jie)凍。

自備物(wu)品

1. 酶標儀(yi)（450nm）

2. 高(gao)精(jing)度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

4. 蒸餾水或去離子水

試劑(ji)盒組成(cheng)

注(zhu)：

1.  標準品(pin)濃度依(yi)次(ci)為：40、20、10、5、2.5、1.25 pg/ml

2.  經過(guo)大量(liang)正(zheng)常(chang)標本(ben)(ben)(ben)檢驗，標本(ben)(ben)(ben)的正(zheng)常(chang)濃度值(zhi)均在(zai)試(shi)劑盒提供的檢測范圍(wei)內，實驗過(guo)程(cheng)中直(zhi)接(jie)取50μL樣本(ben)(ben)(ben)上樣即可。當(dang)有(you)部分樣本(ben)(ben)(ben)值(zhi)超過(guo)最大標準品濃度時(shi)，可用樣本(ben)(ben)(ben)-稀釋液將(jiang)標本(ben)(ben)(ben)進行適當(dang)稀釋后(hou)再進行實驗。

操作注意:

1. 嚴(yan)格按(an)照(zhao)規(gui)定的時間(jian)和溫(wen)度進行溫(wen)育以保證(zheng)準確結果(guo)。所(suo)有(you)試劑(ji)都必須在使(shi)用(yong)前(qian)達到室溫(wen)20-25℃。使(shi)用(yong)后立即冷(leng)藏保存試劑(ji)。所(suo)有(you)液體組分使(shi)用(yong)前(qian)充分搖(yao)勻。

2. 洗板不(bu)正(zheng)確可以導致不(bu)準確的結果(guo)。在加入底物前確保盡(jin)量吸干孔內液體。溫育(yu)過(guo)程(cheng)中不(bu)要讓(rang)微孔干燥掉。

3. 消除(chu)板(ban)底(di)殘(can)留的(de)液體(ti)和手指印(yin)，否則影響OD值。

4. 底物(wu)顯色液應呈無色或很(hen)淺(qian)的顏色，已經變藍的底物(wu)液不能使用。

5. 避免試劑和(he)標本的交叉污染以免造成錯誤結果。

6. 在儲存(cun)和溫(wen)育時避(bi)免強光直接照射(she)。

7. 平衡至室溫后再(zai)打開密封袋以防水滴凝(ning)聚在冷(leng)板(ban)條上。

8. 任何反應試(shi)劑不(bu)能接觸漂(piao)白溶劑或漂(piao)白溶劑所散發的強烈氣(qi)體。任何漂(piao)白成(cheng)分都(dou)會破壞(huai)試(shi)劑盒中反應試(shi)劑的生物(wu)活性。

9. 不能使用(yong)過(guo)期(qi)產品。

10. 如果可能傳播(bo)疾病，所有的(de)樣品(pin)(pin)都應管理好(hao)，按照規(gui)定的(de)程序處理樣品(pin)(pin)和檢(jian)測(ce)裝置。

試劑的準備

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡(heng)后方可使用。

2. 20×洗滌(di)緩沖(chong)液的(de)稀(xi)釋(shi)：蒸餾水(shui)按1：20稀(xi)釋(shi)，即1份(fen)(fen)的(de)20×洗滌(di)緩沖(chong)液加19份(fen)(fen)的(de)蒸餾水(shui)。

洗(xi)板方法(fa)

1.  手工洗(xi)板：甩盡(jin)孔內液(ye)體，每孔加(jia)滿洗(xi)滌液(ye)，靜置1min后甩盡(jin)孔內液(ye)體，在吸水紙上拍干，如此洗(xi)板5次(ci)。

2.  自動洗板機：每(mei)孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作(zuo)步驟

1.從(cong)室(shi)溫平衡(heng)60min后(hou)的鋁箔袋(dai)(dai)中(zhong)取出所(suo)需板條，剩余板條用自封(feng)袋(dai)(dai)密封(feng)放回4℃。

2.設置標(biao)準品孔和樣(yang)本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50uL；

3.待測樣本孔先(xian)加待測樣本50μL，空白孔不加；

4.除空白(bai)孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去(qu)液體，吸水紙上拍(pai)干，每孔加滿(man)洗滌液（350μL），靜(jing)置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每(mei)孔加入底(di)物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加(jia)入終止(zhi)液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

實驗結果計(ji)算:

以(yi)所測標準品(pin)的OD值(zhi)為橫坐(zuo)標，標準品(pin)的濃度值(zhi)為(wei)縱坐標，在坐標紙上或(huo)用(yong)相關軟件繪制標(biao)準曲(qu)線，并得(de)到回歸(gui)方程，將樣品的OD值代入方程(cheng)，計算出樣品的濃度

試(shi)劑盒性能

1. 檢測(ce)范圍：1.25 pg/ml – 40 pg/ml。

2. 靈敏度：最-低檢測濃度小于(yu)0.1 pg/ml。

3. 特異性(xing)：不(bu)與(yu)其它可溶性(xing)結構類似(si)物交叉(cha)反應(ying)。

  重復性(xing)：板內變異(yi)系數(shu)小(xiao)于10% ，板間變異(yi)系數(shu)小(xiao)于15%

其他注意(yi)事項:

1. 最終(zhong)的(de)實(shi)驗(yan)結果與試劑的(de)有效性、實(shi)驗(yan)者的(de)相關(guan)操(cao)作以(yi)及當時的(de)實(shi)驗(yan)環(huan)境密切(qie)相關(guan)，請務必準(zhun)備(bei)充足的(de)標本備(bei)份。

2. 只有全部使用(yong)(yong)本試(shi)劑(ji)(ji)盒配套試(shi)劑(ji)(ji)才(cai)能保(bao)證檢測效果，不(bu)能混用(yong)(yong)其他(ta)制造商或者不(bu)同批次的產品。嚴格遵守試(shi)劑(ji)(ji)盒的實驗(yan)說明才(cai)會得到最佳的檢測結果。

3. 本(ben)公司只對(dui)試劑盒本(ben)身負(fu)(fu)責，不(bu)對(dui)因使(shi)(shi)用該(gai)試劑盒所造成的(de)樣(yang)(yang)本(ben)消耗負(fu)(fu)責，請使(shi)(shi)用者使(shi)(shi)用前充分(fen)考慮到樣(yang)(yang)本(ben)的(de)可能使(shi)(shi)用量，預(yu)留充足的(de)樣(yang)(yang)本(ben)。

4. 使用化學裂解(jie)液制備的(de)組織勻漿或(huo)細(xi)胞(bao)提取液可能會由于某些化學物質的(de)引入導(dao)致ELISA實驗(yan)結果偏差。

5. 若樣本(ben)為(wei)細胞培養上清，因該類(lei)樣本(ben)干擾因素較多(duo)，如：細胞狀態、細胞數(shu)量、采樣時間等(deng)，所以(yi)可能存在(zai)檢測不(bu)出的情(qing)況(kuang)。

6. 某些天(tian)然蛋(dan)白(bai)或重組蛋(dan)白(bai)，包括原核及(ji)真核重組蛋(dan)白(bai)，可能因為(wei)與(yu)本產品所使(shi)用的檢(jian)測抗(kang)體(ti)(ti)(ti)及(ji)捕獲(huo)抗(kang)體(ti)(ti)(ti)不(bu)匹配，而(er)不(bu)被檢(jian)測出。

操作安(an)全須知:

1) 所有(you)的(de)化學(xue)試劑(ji)理(li)應被認為(wei)具有(you)潛(qian)在(zai)危(wei)害,任(ren)何的(de)操作(zuo)都(dou)必(bi)須(xu)提前做(zuo)好實驗防護。在(zai)操作(zuo)試劑(ji)盒或處理(li)樣(yang)本的(de)區(qu)域請不(bu)要飲食。

2) 推薦只(zhi)有(you)經過(guo)良(liang)好實(shi)(shi)驗室培(pei)訓的工(gong)作(zuo)人(ren)員(yuan)方可操(cao)作(zuo)本試劑盒。操(cao)作(zuo)時請佩(pei)戴(dai)合適的防護設施，例如白大(da)衣、實(shi)(shi)驗手(shou)套、安全眼(yan)鏡等。

3) 請(qing)(qing)不要讓試(shi)劑或(huo)樣本接觸皮膚、眼睛和粘膜等身體部位。如不慎接觸，請(qing)(qing)立即用(yong)大量(liang)清(qing)水清(qing)洗。

4) 試劑盒(he)中的(de)終止液(ye)為(wei)酸(suan)性溶液(ye)，在使用(yong)終止液(ye)時，請佩(pei)戴防(fang)-護-服，做好防(fang)護眼睛(jing)、手及面部等的(de)措(cuo)施。 

5)檢測必須符合(he)實(shi)驗室管理規范的(de)規定，嚴格防止交叉污染，所有樣品、洗棄(qi)液(ye)和各種廢(fei)棄(qi)物都應按照實(shi)驗室規定進行處置，嚴禁隨意丟棄(qi)。

6)試(shi)劑盒的液(ye)體組分中，含(han)有(you)防腐劑，可(ke)能引起皮膚過敏反(fan)應(ying)，避免吸(xi)入(ru)煙霧或與皮膚接觸。底物(wu)液(ye)對皮膚、眼(yan)睛(jing)和上呼吸(xi)道有(you)刺激(ji)作(zuo)用，避免吸(xi)入(ru)煙霧。戴上防護(hu)手套，實驗完成后(hou)徹-底洗(xi)手。

免責聲(sheng)明

1. 試劑(ji)盒僅供研究使(shi)用(yong)，不(bu)得用(yong)于臨床實(shi)驗或人體(ti)(ti)實(shi)驗，否則所產生的一切后果，由實(shi)驗者承擔(dan)，本公司概不(bu)負責。

2. 嚴格(ge)按(an)照說明書(shu)中標明的時間、加液量及順(shun)序(xu)進行操作，實驗者違(wei)反說明書(shu)操作，后(hou)果由實驗者承擔。

南京億(yi)迅(xun)生物科(ke)技有限公(gong)司出品的(de)ELISA試劑盒，產品質量穩定，價格實惠，在國(guo)內各科(ke)研院所和(he)高校擁有良好的(de)品譽(yu)。

該類產品有：大鼠白細胞介素1β（IL-1β）ELISA試劑盒，大鼠白細胞介素6（IL-6）ELISA檢測試劑盒，大鼠腫瘤壞死因子α（TNF-α）檢測試劑盒，人癌胚抗原（CEA）ELISA檢測試劑盒等。

歡迎各(ge)界用戶(hu)來電或(huo)留言(yan)垂詢(xun)，無論您是親(qin)自下單(dan)，還是咨詢(xun)技(ji)術(shu)問題，我們將為您真誠服務。