產品名稱：大鼠白細胞介素6（IL-6）ELISA檢測試劑盒

英(ying)文名稱：Rat IL-6 ELISA Kit Instruction

規格：48T/96T

有效期：6個月

保存條件：2-8℃

用途：

本試(shi)劑盒(he)用于體外(wai)定量檢(jian)測血(xue)清、血(xue)漿、組織勻漿及相關(guan)液體樣本中大鼠(shu)白細胞介素6（IL-6）的含量。

檢(jian)測原理

試劑盒采用雙抗(kang)體(ti)一步夾心法酶聯免(mian)疫吸附試驗(yan)（ELISA）。往預先包被大(da)鼠白(bai)細胞介(jie)素(su)6（IL-6）捕獲(huo)抗(kang)體(ti)的包被微孔中，依次加入標(biao)本、標(biao)準品、HRP標(biao)記的檢測(ce)(ce)抗(kang)體(ti)，經(jing)過溫育并(bing)徹-底(di)洗滌。用底(di)物TMB顯(xian)色(se)，TMB在(zai)(zai)過氧化(hua)(hua)物酶的催化(hua)(hua)下轉化(hua)(hua)成藍色(se)，并(bing)在(zai)(zai)酸的作用下轉化(hua)(hua)成最終(zhong)的黃色(se)。顏色(se)的深淺和樣(yang)品中的大(da)鼠白(bai)細胞介(jie)素(su)6（IL-6）呈正相(xiang)關。用酶標(biao)儀在(zai)(zai)450nm 波長(chang)下測(ce)(ce)定吸光度（OD 值），計算樣(yang)品濃(nong)度。

樣品收集(ji)、處理(li)及保存方法

以下只是(shi)列出樣品采集的一般指(zhi)南。所(suo)有樣本采集過程中，不得(de)使用疊氮(dan)鈉做為防腐(fu)劑(ji)。

1.  血(xue)清：使(shi)用不含熱原(yuan)和內毒(du)素的試管，操(cao)作過(guo)程(cheng)中避免任何細胞刺激，將收集于血(xue)清分離管的全(quan)血(xue)標本在室溫放置2小時(shi)或4℃過(guo)夜，然后1000×g離心(xin)20 分鐘(zhong)，取上清即可(ke)，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但(dan)應避免反復凍融(rong)。

2.  血漿：用(yong)EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于(yu)2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取(qu)上清即可檢測，或將上清置于(yu)-20℃或-80℃保存，但應避免反復(fu)凍融(rong)。

3.  細(xi)胞(bao)培養物(wu)上清(qing)或(huo)(huo)其它生物(wu)標(biao)本：請1000×g離心20分(fen)鐘(zhong)，取上清(qing)即(ji)可檢測，或(huo)(huo)將(jiang)上清(qing)置于-20℃或(huo)(huo)-80℃保存，但應避免反復(fu)凍融。

4.  組(zu)織(zhi)勻漿(jiang)：用(yong)預冷的(de)(de)PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組(zu)織(zhi)，去(qu)除殘留(liu)血液(ye)（勻漿(jiang)中裂解的(de)(de)紅細胞會影響測量結果），稱重后(hou)將組(zu)織(zhi)-剪(jian)碎(sui)。將剪(jian)碎(sui)的(de)(de)組(zu)織(zhi)與對應體積的(de)(de)PBS（一(yi)(yi)般按1:9的(de)(de)重量體積比(bi)，比(bi)如1g的(de)(de)組(zu)織(zhi)樣品對應9mL的(de)(de)PBS，具體體積可(ke)根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦(jian)在PBS中加(jia)入蛋白酶抑(yi)制劑）加(jia)入玻璃勻漿(jiang)器中，于冰(bing)上充分研磨。為了進一(yi)(yi)步裂解組(zu)織(zhi)細胞，可(ke)以對勻漿(jiang)液(ye)進行超聲(sheng)破碎(sui)，或反復(fu)凍融。最后(hou)將勻漿(jiang)液(ye)于5000×g離(li)心5~10分鐘，取上清檢測。

注：標本溶血會影響最后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

5.  保存：如果樣本收(shou)集后(hou)不及時檢(jian)測，請按一(yi)次用(yong)量分裝，凍存于-20℃，避(bi)免反復(fu)凍融(rong)，在室(shi)溫(wen)下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1. 酶標儀（450nm）

2. 高精度加(jia)樣(yang)器及槍頭(tou)：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒(heng)溫(wen)箱

4. 蒸餾水或去離子水

試劑盒組成

注：

1.  標準品濃(nong)度依次為：160、80、40、20、10、5 pg/ml

2.  經過大量正常標(biao)本檢(jian)驗(yan)，標(biao)本的(de)正常濃(nong)度值均在試(shi)劑盒提供的(de)檢(jian)測范圍內，實驗(yan)過程中直接取50μL樣(yang)(yang)(yang)本上(shang)樣(yang)(yang)(yang)即可。當有部分(fen)樣(yang)(yang)(yang)本值超過最大標(biao)準品濃(nong)度時，可用樣(yang)(yang)(yang)本-稀釋(shi)液(ye)將(jiang)標(biao)本進行適當稀釋(shi)后再(zai)進行實驗(yan)。

操作注(zhu)意(yi):

1. 嚴格按照規定的(de)時間和(he)溫(wen)度(du)進行溫(wen)育以保(bao)證準確結果。所有試劑(ji)都必須在使用前達(da)到室溫(wen)20-25℃。使用后立即冷藏保(bao)存試劑(ji)。所有液體(ti)組分使用前充(chong)分搖勻。

2. 洗板不(bu)(bu)正確可(ke)以導(dao)致不(bu)(bu)準確的結果。在(zai)加(jia)入(ru)底物前(qian)確保盡量(liang)吸(xi)干孔內液體(ti)。溫育過程(cheng)中不(bu)(bu)要讓微(wei)孔干燥掉(diao)。

3. 消除(chu)板底殘留的(de)液體和手指印，否則影響OD值。

4. 底(di)物顯(xian)色(se)(se)(se)液(ye)應呈無色(se)(se)(se)或很淺的(de)顏色(se)(se)(se)，已經變(bian)藍的(de)底(di)物液(ye)不能使用。

5. 避免試劑和(he)標(biao)本的交叉污(wu)染以免造成(cheng)錯誤結果。

6. 在儲存(cun)和溫育時(shi)避免強光直接照射(she)。

7. 平衡至室溫(wen)后(hou)再(zai)打開密(mi)封袋以防水(shui)滴凝(ning)聚在冷板條(tiao)上(shang)。

8. 任何反應(ying)試劑(ji)不(bu)能接觸漂白溶(rong)劑(ji)或(huo)漂白溶(rong)劑(ji)所散發的(de)強烈氣體(ti)。任何漂白成(cheng)分都會破(po)壞試劑(ji)盒中(zhong)反應(ying)試劑(ji)的(de)生物活性。

9. 不能使用過期產品。

10. 如(ru)果可能(neng)傳播疾病，所(suo)有的樣(yang)品都應管(guan)理(li)好，按照規定的程序處理(li)樣(yang)品和檢測裝置。

試劑的準備

1.試(shi)劑盒從冷藏環境中取出(chu)應在室溫平衡后方可使(shi)用。

2. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗(xi)板方(fang)法

1.手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

2.自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步(bu)驟

1.  從室溫(wen)平(ping)衡60min后的鋁箔(bo)袋中(zhong)取出所需板(ban)條，剩余板(ban)條用自封袋密封放回4℃。

2.  設置標(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)孔和樣本孔,標(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)孔各加(jia)不同濃度的標(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)50μL；

3.  待(dai)測樣(yang)(yang)本孔先加(jia)待(dai)測樣(yang)(yang)本50μL，空白孔不加(jia)；

4.  除空白孔外(wai),標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(ying)孔，37℃水(shui)浴鍋或恒溫(wen)箱溫(wen)育(yu)60min。

5.  棄去液體(ti)，吸(xi)水紙上(shang)拍干，每孔加滿洗(xi)滌液（350μL），靜(jing)置1min，甩去洗(xi)滌液，吸(xi)水紙上(shang)拍干，如(ru)此(ci)重復洗(xi)板5次（也可用洗(xi)板機(ji)洗(xi)板）。

6.  每孔加入(ru)底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加(jia)入(ru)終(zhong)止(zhi)液50μL，15min內(nei)，在450nm波長處測(ce)定各(ge)孔的OD值。

實驗(yan)結果計算(suan):

以所測標(biao)(biao)準品的(de)OD值為(wei)橫坐(zuo)標(biao)(biao)，標(biao)(biao)準品的(de)濃(nong)度值為(wei)縱坐(zuo)標(biao)(biao)，在坐(zuo)標(biao)(biao)紙(zhi)上或(huo)用(yong)相關軟(ruan)件(jian)繪制標(biao)(biao)準曲線，并得到回歸方程，將(jiang)樣(yang)品的(de)OD值代入方程，計算出樣(yang)品的(de)濃(nong)度。

試劑盒性能

1.檢測范圍(wei)：5 pg/ml – 160 pg/ml。

2.  靈(ling)敏度(du)：最-低檢測濃度(du)小于(yu)1.0 pg/ml。

3.  特異性：不與其它可溶性結(jie)構類(lei)似物(wu)交叉(cha)反應。

 重復性：板內變異(yi)系數小于10% ，板間變(bian)異系數小于(yu)15%

其他注意(yi)事(shi)項(xiang):

1. 最終的(de)實驗(yan)(yan)結果與(yu)試劑(ji)的(de)有效(xiao)性、實驗(yan)(yan)者的(de)相(xiang)關(guan)操作以及當(dang)時的(de)實驗(yan)(yan)環境密(mi)切相(xiang)關(guan)，請(qing)務必(bi)準備(bei)充(chong)足的(de)標本備(bei)份。

2. 只有全(quan)部(bu)使用本試劑盒(he)配套試劑才(cai)能保證檢測效果，不能混用其他(ta)制造商或者不同(tong)批次(ci)的產品。嚴格(ge)遵守(shou)試劑盒(he)的實驗說明才(cai)會(hui)得到(dao)最(zui)佳的檢測結果。

3. 本(ben)(ben)公司只(zhi)對試(shi)劑盒(he)本(ben)(ben)身負責，不對因使(shi)用(yong)該(gai)試(shi)劑盒(he)所(suo)造成的樣(yang)本(ben)(ben)消耗負責，請(qing)使(shi)用(yong)者(zhe)使(shi)用(yong)前充分考慮到樣(yang)本(ben)(ben)的可能使(shi)用(yong)量，預留充足的樣(yang)本(ben)(ben)。

4. 使用化(hua)學裂解液制備的組織勻漿或細胞提(ti)取液可能會(hui)由(you)于(yu)某些化(hua)學物(wu)質的引入導致ELISA實(shi)驗結果(guo)偏(pian)差。

5. 若樣(yang)本為細胞(bao)培(pei)養上清，因該類樣(yang)本干(gan)擾因素較多，如：細胞(bao)狀態、細胞(bao)數量(liang)、采(cai)樣(yang)時間(jian)等，所(suo)以可能存在檢測不出的(de)情況。

6. 某些天然蛋(dan)白或重組(zu)蛋(dan)白，包括原核及真核重組(zu)蛋(dan)白，可能(neng)因為與本產品所使用的(de)檢測抗(kang)體(ti)及捕(bu)獲抗(kang)體(ti)不匹配(pei)，而不被檢測出。

操作安全(quan)須知:

1) 所有(you)的化學試劑(ji)理應被(bei)認為具有(you)潛在危害(hai),任何(he)的操作都必(bi)須提(ti)前做好實驗防護。在操作試劑(ji)盒(he)或處理樣(yang)本的區域請不要飲食。

2) 推薦只有(you)經過良好實驗(yan)室(shi)培訓(xun)的工作人員方可(ke)操(cao)(cao)作本試劑盒。操(cao)(cao)作時請(qing)佩戴合適的防護(hu)設施，例如白大衣(yi)、實驗(yan)手套(tao)、安全眼鏡等(deng)。

3) 請(qing)不(bu)要讓(rang)試劑或樣本接觸(chu)皮膚、眼睛(jing)和粘膜等身體(ti)部位。如(ru)不(bu)慎接觸(chu)，請(qing)立即用大量清水清洗。

4) 試劑(ji)盒(he)中的(de)終止液為酸(suan)性溶液，在使(shi)用(yong)終止液時，請佩戴防-護-服，做好防護眼睛、手(shou)及面部等(deng)的(de)措施。 

5)檢測(ce)必須符合實(shi)驗(yan)室(shi)管(guan)理規范的規定，嚴(yan)格防止(zhi)交叉污(wu)染，所(suo)有樣品、洗棄液和各種廢(fei)棄物都(dou)應按(an)照(zhao)實(shi)驗(yan)室(shi)規定進行處置，嚴(yan)禁(jin)隨意丟棄。

6)試劑(ji)盒的液(ye)(ye)體組分中(zhong)，含有(you)(you)防腐劑(ji)，可能引起皮(pi)膚(fu)過敏反應，避(bi)免吸(xi)入煙霧(wu)或與(yu)皮(pi)膚(fu)接觸。底物(wu)液(ye)(ye)對皮(pi)膚(fu)、眼睛和上呼吸(xi)道有(you)(you)刺(ci)激(ji)作(zuo)用(yong)，避(bi)免吸(xi)入煙霧(wu)。戴上防護(hu)手(shou)套，實驗完成后徹(che)-底洗手(shou)。

免責(ze)聲(sheng)明

1.試劑盒僅(jin)供(gong)研究(jiu)使用(yong)，不(bu)得用(yong)于臨床實驗(yan)或人體(ti)(ti)實驗(yan)，否則所產生(sheng)的一切后果，由實驗(yan)者承(cheng)擔，本公(gong)司概不(bu)負責。

2.嚴格(ge)按照說(shuo)明(ming)書(shu)中標(biao)明(ming)的時間(jian)、加液量及順序(xu)進行操(cao)作(zuo)，實(shi)驗者違反說(shuo)明(ming)書(shu)操(cao)作(zuo)，后果(guo)由實(shi)驗者承(cheng)擔(dan)。

大鼠白細胞介素6（IL-6）ELISA檢測試劑盒

南京億(yi)迅(xun)生物科技有限公司出(chu)品的各(ge)類ELISA試劑盒，產品質量穩定，價格實惠，在國內各(ge)科研院所和高校(xiao)擁(yong)有良好的品譽。

該類產品有：人(ren)卵巢(chao)癌抗原（CA125）ELISA檢(jian)測試劑(ji)盒(he)，小鼠白細(xi)胞介(jie)素(su)6（IL-6）ELISA檢(jian)測試劑(ji)盒(he)，小鼠白細(xi)胞介(jie)素(su)10（IL-10）ELISA檢(jian)測試劑(ji)盒(he)，小鼠孕烯醇酮(tong)（PREG）ELISA 檢(jian)測試劑(ji)盒(he)等(deng)。

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