高鐵血紅蛋白（MetHb）測試盒 

一(yi)、實驗儀器：試管、微(wei)量移液器、旋渦(wo)混勻(yun)器、可見(jian)分光(guang)光(guang)度(du)計(ji)（540、602和(he)630nm）

二、適用范(fan)圍：本試劑盒可測各種動物全血等(deng)樣本中高鐵血紅蛋白含量；

三、測定意義：

體內一氧(yang)化氮(dan)彌(mi)散(san)入血(xue)(xue)后，很快與(yu)(yu)氧(yang)合血(xue)(xue)紅蛋白(bai)(bai)結合形(xing)成(cheng)高(gao)鐵血(xue)(xue)紅蛋白(bai)(bai)（methemoglobin, MetHb），NO與(yu)(yu)MetHb變化相關，故全血(xue)(xue)MetHb檢測(ce)近年(nian)來受(shou)到臨床的(de)廣泛重視。同時(shi)血(xue)(xue)液(ye)中高(gao)鐵血(xue)(xue)紅蛋白(bai)(bai)含量的(de)測(ce)定(ding)對(dui)接(jie)觸芳香族氨基、硝基化合物所引起的(de)中毒(du)性疾病(bing)的(de)診斷與(yu)(yu)治(zhi)療，有重要的(de)意義。

四、試(shi)劑組成及(ji)配制：

     A.試劑(ji)一：血(xue)紅蛋白測定濃縮液，1ml X 2支(zhi),2—8℃保存。

               血紅蛋(dan)白測定應用(yong)(yong)液(ye)的配(pei)制：臨(lin)用(yong)(yong)前(qian)將濃縮液(ye)用(yong)(yong)雙(shuang)蒸水1:99稀釋，即(ji)100倍稀釋，現(xian)用(yong)(yong)現(xian)配(pei)。配(pei)好的試(shi)劑2—8℃避光保(bao)存，可存放一個月(yue)以上。

     B.試劑二: 高鐵血紅(hong)蛋(dan)白測(ce)定濃(nong)縮液，30ml X 1瓶(ping)，2—8℃。

              高(gao)鐵(tie)血(xue)紅(hong)蛋(dan)白測定應(ying)用液(ye)的配制：  濃縮液(ye):雙蒸水=1:9稀(xi)釋(shi)，即10倍稀(xi)釋(shi)，可存放6個(ge)月以上。

     C.試(shi)劑(ji)三(san)：制(zhi)作還原血紅(hong)蛋(dan)白曲線用

              ① 白色(se)粉劑(ji) X 1支，2—8 ℃避光保存(cun)。

              ② 稀釋液，1ml X 1支，2—8 ℃保存。

         ;     試劑三應用液配(pei)制：臨用前每(mei)支粉劑加(jia)入1ml稀釋液，現用現配(pei)，注意避光。

     D.試劑四：制(zhi)作高(gao)鐵血紅蛋白曲線用(yong)

              ① 磚(zhuan)紅色(se)粉劑 X 1支，2—8℃避光保存。

              ② 稀釋液，1ml X 1支(zhi)，2—8℃保存。

              試(shi)劑四應用液配制：臨(lin)用前每支粉劑加入1ml稀釋液，現用現配，注意避光

五、操作過程：

1、制備(bei)抗凝(ning)全(quan)血：取全(quan)血立即加入到肝素抗凝(ning)管內，加蓋封口(kou)，輕輕顛倒混勻。

2、血(xue)紅蛋白含量的測定(ding)：取(qu) 0.01ml 全血(xue)與 2.5ml 的 100 倍(bei)稀釋的試(shi)劑一應(ying)用(yong)液（血(xue)紅蛋白測定(ding)應(ying)用(yong)液），混勻，靜置5分(fen)鐘(zhong)后，1cm光(guang)徑，雙蒸水調零(ling)，540nm處(chu)測定(ding)各(ge)管(guan)吸光(guang)度值(zhi)。

3、高鐵血紅蛋白測定： 取(qu)0.05ml全血，加入2.5ml的試(shi)劑二稀釋應用液（即高鐵血紅蛋白測定應用液），混(hun)勻，靜(jing)置5分鐘后，1cm光(guang)徑，雙(shuang)蒸水調零(ling)，測定630nm處(chu)及602nm處(chu)吸光(guang)度值(zhi)。如果沒有(you)雙(shuang)波長的分光(guang)光(guang)度計則(ze)可(ke)以先(xian)測定各(ge)管(guan)630nm處(chu)吸光(guang)度值(zhi)，然后再測各(ge)管(guan)602 nm處(chu)吸光(guang)度值(zhi)。但一(yi)定要注意(yi)各(ge)管(guan)的編號(hao)不(bu)要弄錯。

六(liu)、計算公(gong)式：

①、血紅蛋白含量的計算：血紅蛋白克數/升=540nm處吸光度值×367.7

②、高(gao)鐵血(xue)紅(hong)蛋白百分(fen)比計算： MetHb% = (A630nm—r x A602nm)÷(A602nm x(R— r)) ×100%

③、高(gao)鐵血紅蛋白(bai)含(han)量的計算：高(gao)鐵血紅蛋白(bai)克數 /升 = MetHb%×血紅蛋白(bai)克數/升

【注(zhu)1】 A630即在630nm波(bo)長(chang)時(shi)樣本(ben)的(de)吸(xi)光(guang)度值；A602即在602nm波(bo)長(chang)時(shi)樣本(ben)的(de)吸(xi)光(guang)度值

【注2】 R與r均為常數，R=1.81；r=0.14。（本研究所測(ce)定常數）

即計算(suan)公式(shi)可(ke)以簡化為：

①、高鐵血紅蛋白百(bai)分比： MetHb% = (A630nm—0.14×A602nm) ÷(A602nm ×1.67) ×100%

②、高(gao)鐵血紅蛋白含量的(de)計(ji)算：高(gao)鐵血紅蛋白克數(shu)/升(sheng) = MetHb%×血紅蛋白克數(shu) /升(sheng)

七(qi)、注(zhu)意事項：

①、取(qu)血后應在1小(xiao)(xiao)時內完成實驗(yan)，否則影響測(ce)定結果(guo)，因為(wei)紅細胞中的還(huan)原酶可使高鐵血紅蛋(dan)白逐(zhu)漸還(huan)原，使結果(guo)降低(di)。但(dan)可放-20℃以下冷凍保存，如果(guo)血樣較多，可將全血分(fen)成幾小(xiao)(xiao)管(guan)，每次測(ce)試(shi)可取(qu)其(qi)一小(xiao)(xiao)管(guan)，每次測(ce)試(shi)可取(qu)其(qi)一小(xiao)(xiao)管(guan)，余下各管(guan)仍(reng)保存-20℃以下以備(bei)重(zhong)復測(ce)試(shi)，其(qi)結果(guo)不受影響。

②、本實驗(yan)可用雙波長分光(guang)光(guang)度(du)計測定(ding)，可同時(shi)測定(ding)602nm處及(ji)630nm處吸(xi)光(guang)度(du)值(zhi)，進行(xing)計算(suan)。也可用單波長分光(guang)光(guang)度(du)計測定(ding)，可以(yi)先測定(ding)各(ge)(ge)管(guan)630nm處吸(xi)光(guang)度(du)值(zhi)，然(ran)后再測各(ge)(ge)管(guan)602nm處吸(xi)光(guang)度(du)值(zhi)。但一定(ding)要注(zhu)意各(ge)(ge)管(guan)的編(bian)號(hao)不要弄錯。

③如果實驗室分光光度計沒有雙波長掃描功能，可以不(bu)做標準曲線，直接用本實驗室數據。R與r均為常數，R=1.81;r=0.14

④所用器皿要干凈。

八、測定原理：

高鐵(tie)血(xue)紅蛋白(bai)(bai)在630nm波長處有一特征吸收峰(feng)，而高鐵(tie)血(xue)紅蛋白(bai)(bai)（MetHb）和還原血(xue)紅蛋白(bai)(bai)（Hb）在602nm波長處光密度值相等，利用此(ci)關系可以通(tong)過相應(ying)的公式算出(chu)高鐵(tie)血(xue)紅蛋白(bai)(bai)含(han)量。

高鐵血紅蛋白（MetHb）測試盒

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