組織自發熒光淬滅劑（AutoFluo Quencher）產品說明

更新時間：2024-07-19

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產品名(ming)稱(cheng)：組織自發熒光淬(cui)滅劑（AutoFluo Quencher）

產品(pin)簡介(jie)：

許(xu)多組織會產生可透過各種波長濾光(guang)(guang)(guang)片(pian)的(de)(de)內源性自(zi)(zi)發(fa)熒(ying)光(guang)(guang)(guang)，顯(xian)著干擾抗體標(biao)記熒(ying)光(guang)(guang)(guang)觀察甚至導致免疫組化染色失敗。自(zi)(zi)發(fa)熒(ying)光(guang)(guang)(guang)淬(cui)滅(mie)試劑(ji)中(zhong)的(de)(de)離子(zi)(zi)(zi)可通過碰撞方式捕獲自(zi)(zi)發(fa)熒(ying)光(guang)(guang)(guang)光(guang)(guang)(guang)源分子(zi)(zi)(zi)發(fa)出的(de)(de)電子(zi)(zi)(zi)，阻止該電子(zi)(zi)(zi)從激(ji)發(fa)態回歸基態和能量釋放，從而淬(cui)滅(mie)自(zi)(zi)發(fa)熒(ying)光(guang)(guang)(guang)。采用優化的(de)(de)孵育時間，可以最大限度地(di)消除自(zi)(zi)發(fa)熒(ying)光(guang)(guang)(guang)而不明顯(xian)影響抗體標(biao)記的(de)(de)熒(ying)光(guang)(guang)(guang)。

適用：各種(zhong)組(zu)織、細胞(bao)免疫熒光(guang)(guang)染色的(de)自發熒光(guang)(guang)消(xiao)除。特別適用于神(shen)經組(zu)織自發熒光(guang)(guang)淬滅。

儲存(cun)：4 oC 避光。

使用方法(fa)：

以下步(bu)驟(zou)在免(mian)疫熒(ying)(ying)光(guang)組(zu)化染色完畢之后(而(er)非在熒(ying)(ying)光(guang)染色完畢之前)執行。對特定(ding)的組(zu)織(zhi)和(he)細(xi)胞類型，必(bi)需(xu)優化孵育時間以便最大限度淬(cui)滅(mie)自(zi)發(fa)熒(ying)(ying)光(guang)而(er)不(bu)明(ming)顯影(ying)響抗體標記的熒(ying)(ying)光(guang)(步(bu)驟(zou) 2)。請(qing)仔細(xi)閱讀后面的說明(ming)。

1. 吸去 PBS 或相應洗(xi)滌緩沖液，用蒸餾水短暫沖洗(xi)組(zu)織切片或細(xi)胞培養板中(zhong)的細(xi)胞。

2. 加入適量(liang)但充足的(de)自發熒光淬滅(mie)劑(ji)覆蓋組織切片或瓶(ping)皿中(zhong)的(de)細胞(bao)。室(shi)溫孵育 10-90min。

3. 吸(xi)去自發熒(ying)光淬(cui)滅(mie)劑，用蒸(zheng)餾(liu)水短暫(zan)沖洗(xi)。

4. 吸去蒸餾水，用 PBS 覆(fu)蓋組織切片或位于細胞培養板中的(de)細胞。

5. 封片。建議使用抗熒光(guang)衰(shuai)減封片劑。該封片劑可防止抗體(ti)標記熒光(guang)衰(shuai)退。

6. 熒光顯微(wei)鏡觀察。

說明：

1. 不同(tong)(tong)物種(zhong)不同(tong)(tong)類(lei)型組(zu)織(zhi)(zhi)的(de)自發熒(ying)光具有(you)不同(tong)(tong)的(de)特征，使用組(zu)織(zhi)(zhi)自發熒(ying)光淬(cui)滅劑的(de)效果可能(neng)會(hui)有(you)差別。另外，任(ren)何針對自發熒(ying)光的(de)淬(cui)滅，將會(hui)在(zai)一定程(cheng)度(du)上降低抗(kang)體(ti)熒(ying)光強度(du)。所幸的(de)是該(gai)試(shi)劑對自發熒(ying)光的(de)淬(cui)滅程(cheng)度(du)遠(yuan)遠(yuan)超出(chu)抗(kang)體(ti)熒(ying)光強度(du)的(de)降低，因(yin)而(er)能(neng)在(zai)二者之間獲得(de)較好(hao)的(de)平(ping)衡(heng)。由(you)于不很清楚的(de)原(yuan)因(yin)，本試(shi)劑對于消除腦脊(ji)髓神(shen)經組(zu)織(zhi)(zhi)的(de)自發熒(ying)光具有(you)更好(hao)的(de)效果。

2. 為獲(huo)得最佳效(xiao)果(guo)，必(bi)需優(you)化(hua)(hua)孵育(yu)時(shi)(shi)間(jian)(jian)以便(bian)最大(da)限(xian)度淬滅(mie)某一特定組(zu)織(zhi)的(de)(de)(de)自發(fa)熒(ying)(ying)(ying)(ying)光而不(bu)明顯影(ying)響(xiang)抗體(ti)標記(ji)的(de)(de)(de)熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(步(bu)驟 2)。重要的(de)(de)(de)標本應在確定最佳孵育(yu)時(shi)(shi)間(jian)(jian)之(zhi)后(hou)使(shi)用本試劑(ji)。進行優(you)化(hua)(hua)時(shi)(shi)，可取數張組(zu)織(zhi)切(qie)片或(huo)位于培養皿中(zhong)的(de)(de)(de)細胞，在免疫(yi)熒(ying)(ying)(ying)(ying)光組(zu)化(hua)(hua)染色完畢(bi)之(zhi)后(hou)加入組(zu)織(zhi)自發(fa)熒(ying)(ying)(ying)(ying)光淬滅(mie)劑(ji)，孵育(yu) 5、10、30、60、90 分(fen)(fen)(fen)鐘等不(bu)同時(shi)(shi)間(jian)(jian)，沖洗后(hou)觀察熒(ying)(ying)(ying)(ying)光。如(ru)(ru)果(guo)組(zu)織(zhi)自發(fa)熒(ying)(ying)(ying)(ying)光仍然(ran)很(hen)強，可延長孵育(yu)時(shi)(shi)間(jian)(jian)；如(ru)(ru)果(guo)孵育(yu)時(shi)(shi)間(jian)(jian)小于 10 分(fen)(fen)(fen)鐘而熒(ying)(ying)(ying)(ying)光消退十分(fen)(fen)(fen)明顯，可將孵育(yu)時(shi)(shi)間(jian)(jian)減少為 1-5 分(fen)(fen)(fen)鐘，或(huo)者取少量的(de)(de)(de)組(zu)織(zhi)自發(fa)熒(ying)(ying)(ying)(ying)光淬滅(mie)劑(ji)加等份的(de)(de)(de)雙蒸水稀釋，然(ran)后(hou)孵育(yu) 10-90 分(fen)(fen)(fen)鐘進行優(you)化(hua)(hua)。

3. 組織自發熒(ying)(ying)光(guang)淬滅(mie)劑(ji)必須在完成(cheng)免疫熒(ying)(ying)光(guang)組化染色后使用，否則將(jiang)嚴(yan)重(zhong)降低抗體熒(ying)(ying)光(guang)。

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