1、 產品(pin)介(jie)紹

Red NUPharoseFF是(shi)活(huo)性(xing)(xing)紅(hong)120（又稱普施安紅(hong)HE-3B）活(huo)性(xing)(xing)染料(liao)(liao)鍵合在NUPharose瓊脂(zhi)糖(tang)微球上得到的親和(he)填(tian)料(liao)(liao)。活(huo)性(xing)(xing)紅(hong)120是(shi)多環染料(liao)(liao)，與(yu)NADP+具(ju)有結(jie)構類似性(xing)(xing)，可用(yong)于純(chun)(chun)化核苷酸依賴(lai)性(xing)(xing)酶(mei)、脂(zhi)蛋白、乳酸脫氫酶(mei)、纖(xian)溶酶(mei)原、肽、激(ji)素等的純(chun)(chun)化。除(chu)了(le)作為(wei)親和(he)填(tian)料(liao)(liao)使用(yong)，本(ben)產品配基含(han)芳香環和(he)陰(yin)離子，也通過靜電作用(yong)或者疏水相互作用(yong)進行非親和(he)純(chun)(chun)化。

2、 產品特點與(yu)技術指標

3、 使用(yong)方法參考

 3.1 色譜柱裝填

以(yi)下(xia)闡述與層(ceng)析系統連(lian)接時，填(tian)料的色譜柱裝填(tian)方法(fa)。

（1）所(suo)有(you)需要(yao)用到(dao)的材料的溫度要(yao)與色譜操作的溫度一樣，液體最(zui)好做脫氣處理。

（2）填(tian)料用量計算：通過(guo)沉(chen)降定量填(tian)料體積，需要(yao)的沉(chen)降填(tian)料體積=柱(zhu)體(ti)積(ji)×壓縮(suo)比（也稱壓縮(suo)因子）。沉(chen)降體(ti)積(ji)是指(zhi)填料在20%乙醇保存液中自然(ran)沉降讀取的穩(wen)定體積。Red NUPharose FF的壓縮比為(wei)1.15。為(wei)使達(da)到(dao)裝(zhuang)柱(zhu)比(bi)，可通過(guo)柱(zhu)頭下壓的方法，也(ye)可以通過(guo)高流速壓柱(zhu)。

（3）填料清洗：將填料懸液充分搖勻后量(liang)取相應體(ti)(ti)積(ji)，抽濾除(chu)去(qu)液體(ti)(ti)，并用約3倍填料體積的純化水洗滌(di)，重復3次，以(yi)除去保存液。

（4）裝(zhuang)柱填料懸(xuan)液(ye)準備：將填料轉移(yi)到適當(dang)的容器中，加入適量的裝(zhuang)柱液(ye)，制成(cheng) 50~75 v%的裝柱填料懸液，使(shi)用前攪勻。

（5）裝填前準備：在清洗(xi)干凈的(de)層析柱(zhu)下端加入裝柱(zhu)液，以除去下墊片及層析柱(zhu)下端的(de)空氣(qi)，在柱(zhu)內保(bao)留少量的(de)裝柱(zhu)液，擰緊下堵頭，調整(zheng)柱(zhu)子使(shi)其(qi)垂直于地面(mian)。

（6）裝(zhuang)(zhuang)填：將(jiang)攪勻后(hou)的(de)填料懸液一次性緩(huan)慢倒入(ru)層(ceng)析(xi)柱(zhu)(zhu)內(nei)（必要時使(shi)用裝(zhuang)(zhuang)柱(zhu)(zhu)器），為(wei)避免(mian)引入(ru)氣泡，應使(shi)之沿層(ceng)析(xi)柱(zhu)(zhu)內(nei)壁自然流下(xia)。將(jiang)所有填料加入(ru)后(hou)，用裝(zhuang)(zhuang)柱(zhu)(zhu)液將(jiang)裝(zhuang)(zhuang)柱(zhu)(zhu)器加滿(man)，擰緊裝(zhuang)(zhuang)柱(zhu)(zhu)器上蓋，將(jiang)柱(zhu)(zhu)子(zi)與層(ceng)析(xi)系統連接。

（7）壓(ya)柱(zhu)：使柱(zhu)內填料自(zi)然沉降（或 50~150 cm/h 的低流速下(xia)沉降），待填料(liao)沉降后（填料(liao)與液體的界(jie)面(mian)清晰），去除裝柱(zhu)器，裝上上柱(zhu)頭(tou)，并將柱(zhu)頭(tou)下(xia)降至界(jie)面(mian)處(chu)；通過(guo)(guo)高(gao)流速（推薦流速見下(xia)表，注意柱(zhu)壓不超過(guo)(guo)0.3MPa），繼續(xu)壓柱(zhu)至界面清晰穩定，標記界面穩定時的柱(zhu)高(gao)。停泵，打開柱(zhu)頭上的閥門/堵頭，關閉柱底(di)的閥門(men)/堵(du)頭(tou)，下壓柱頭(tou)至(zhi)標記位置下方與壓縮比對(dui)應的(de)位置，旋緊柱頭(tou)，裝(zhuang)柱完(wan)成(cheng)(cheng)。裝(zhuang)柱完(wan)成(cheng)(cheng)后(hou)，需用高流速(su)平(ping)衡柱內的(de)填料。

3.2  柱效測定(ding)和評(ping)價

完成裝柱(zhu)后、使用(yong)前(qian)可通(tong)過柱(zhu)效測定和評價可以確認層析(xi)柱(zhu)裝填(tian)質量。柱(zhu)效通(tong)常(chang)用(yong)理論塔板高度（HETP）和非對稱(cheng)因(yin)子（As）來評價。

3.3  平衡(heng)與上樣（Equilibration & Loading）

在上樣前，需用(yong)緩沖液A在操作流速下平衡(heng)層析柱(zhu)，該(gai)過(guo)程通常需要(yao)5~10個柱體(ti)積的緩沖液(ye)A，以電(dian)導、pH等檢測信號參(can)數(shu)不(bu)變且與(yu)緩沖(chong)液A對應為(wei)準。可以選(xuan)擇磷 酸(suan)鹽、Tris-HCl等常見的(de)緩沖體(ti)(ti)系。

上樣量(liang)可(ke)按“mg目標蛋白/mL填料"來(lai)設定，通常(chang)為DBC10%的(de)50~80%，例如Red NUPharoseFF產品對的動態結合(he)載量為~15mg/mL，純化時(shi)的(de)上樣量可為7.5~12mg/mL。除了DBC10%，也(ye)可以測(ce)試上樣(yang)(yang)(yang)(yang)流穿液中的目標蛋(dan)白確定上樣(yang)(yang)(yang)(yang)量(liang)。上樣(yang)(yang)(yang)(yang)前需要對樣(yang)(yang)(yang)(yang)品進(jin)行離(li)心（10000 g以上(shang)）、過(guo)濾（0.22或0.45μm）處理，以免堵塞(sai)色譜(pu)柱。

上樣后需要3~10個柱(zhu)體積的(de)緩沖(chong)液A 再平(ping)衡層析柱。

3.5 洗脫(tuo)（Elution）

通常在緩沖液A中添(tian)加3 M NaCl或者2 M KCl可將目標蛋(dan)白洗(xi)脫。

3.6  再生（Regeneration）

純化后(hou)可用弱酸和(he)弱堿(jian)性緩沖液交替(ti)沖洗色譜柱3~4 次，進行填料再(zai)生，例如0.1mol/L NaAc+0.5mol/L NaCl（pH4.5）和0.1mol/L Tris·HCl+0.5mol/L NaCl（pH8.5）。然后用平(ping)衡緩沖(chong)溶液平(ping)衡。

3.7 在位清洗(xi)（CIP）

通常上述的洗(xi)脫(tuo)和(he)再生過程可(ke)將填(tian)料(liao)清洗(xi)。若(ruo)發(fa)生柱壓升高，或為了避免交叉污染，可(ke)采(cai)用以下溶(rong)劑進行在(zai)位(wei)清洗(xi)：0.1~0.5 mol/L NaOH、70%乙醇或30%異丙(bing)醇等。在位清(qing)洗可(ke)有(you)效去除(chu)介質(zhi)上(shang)的(de)雜質(zhi)，反向效果更佳。清(qing)洗后需用(yong)3~5 柱體(ti)積的純水除去上述溶劑(ji)。

3.8  填料保存

填料的(de)初始保存液為20%乙醇(chun)，使用過(guo)后(hou)可繼(ji)續用20%乙醇并添加0.5M NaCl保(bao)(bao)存。保(bao)(bao)存溫度在(zai)2~30 ℃為(wei)宜(yi)，不可(ke)凍存。

普施安紅-瓊脂糖

南京億迅生(sheng)物科技有限公司(si)出品的各類干擾(rao)物質，產品質量穩定，價格實惠(hui)，在國內各科研院(yuan)所和高校(xiao)擁有良好的品譽。

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