【產品名(ming)稱(cheng)】

通用名稱：小鼠孕酮（PROG）ELISA定量檢測試劑盒

英文名稱：Mouse Progesterone ELISA KIT

【包裝規(gui)格】

96T/48T

【預期用途】

僅供科研使用，定量檢測血(xue)清(qing)、血(xue)漿、細(xi)胞培養上清(qing)液中孕(yun)酮（PROG）的濃度。

【檢驗原(yuan)理】

本試劑盒采用競爭法酶(mei)聯免(mian)疫(yi)吸附(fu)試驗（ELISA）。在預包被抗(kang)孕(yun)(yun)酮(tong)（PROG）抗(kang)體(ti)（固相(xiang)抗(kang)體(ti)）的(de)(de)微孔(kong)(kong)酶(mei)標(biao)(biao)板中(zhong)(zhong)，加(jia)(jia)入(ru)小鼠(shu) 孕(yun)(yun)酮(tong)（PROG）校準品(pin)(pin)和(he)待測(ce)(ce)樣本，再加(jia)(jia)入(ru)HRP標(biao)(biao)記的(de)(de)小鼠(shu) 孕(yun)(yun)酮(tong)（PROG）抗(kang)原(yuan)（酶(mei)標(biao)(biao)抗(kang)原(yuan)），經過(guo)溫育與充分(fen)洗滌，去除未結合的(de)(de)組(zu)分(fen)，在微孔(kong)(kong)板固相(xiang)表面形成固相(xiang)抗(kang)體(ti)-酶(mei)標(biao)(biao)抗(kang)原(yuan)的(de)(de)免(mian)疫(yi)復合物(wu)(wu)(wu)。加(jia)(jia)底物(wu)(wu)(wu)A和(he)B，底物(wu)(wu)(wu)在HRP催化下，產(chan)生藍色(se)產(chan)物(wu)(wu)(wu)，在終止(zhi)液（2M 硫酸(suan)）作用下，最終轉化為黃色(se)，在酶(mei)標(biao)(biao)儀450nm波長上測(ce)(ce)定吸光(guang)度（OD值(zhi)），吸光(guang)度（OD值(zhi)）與待測(ce)(ce)樣品(pin)(pin)中(zhong)(zhong)小鼠(shu) 孕(yun)(yun)酮(tong)（PROG）的(de)(de)濃(nong)度負相(xiang)關。擬合校準品(pin)(pin)曲線，可(ke)以計(ji)算出樣本中(zhong)(zhong)小鼠(shu) 孕(yun)(yun)酮(tong)（PROG）的(de)(de)濃(nong)度。

【主要組(zu)成成分】

主(zhu)要成分

標(biao)準品(pin)濃(nong)度(du)依次為：16、8、4、2、1、0 ng/mL

本品必(bi)須按照具有(you)潛在的(de)感染性進行處理，處理過程應(ying)當(dang)遵(zun)循通用的(de)安(an)全措(cuo)施。

需要但未提(ti)供的材(cai)料(liao)及(ji)耗材(cai)

1、酶標儀

2、精(jing)密移液器(qi)及一次性吸頭

3、蒸餾水

4、洗(xi)瓶或者自動(dong)洗(xi)板(ban)機(ji)

5、37℃水浴鍋或恒溫箱

6、500ml量筒

7、無粉一次(ci)性乳膠(jiao)手(shou)套

【儲(chu)存條件(jian)及(ji)有效期(qi)】

  1、2-8℃保存，切勿(wu)冷凍，有效期6個(ge)月。

  2、開封使用(yong)后，包(bao)被微孔板放入帶(dai)有干燥(zao)劑(ji)的自(zi)封袋(dai)中(zhong)，密閉(bi)自(zi)封袋(dai)，并將全部試劑(ji)放回2-8℃冰箱。

  3、開封后，按照建議的(de)條件保存，校準品、包被微孔板(ban)和HRP標(biao)記抗體，有效期為14天，其(qi)他成分在標(biao)簽標(biao)明的(de)有效期內(nei)是(shi)穩定的(de)。

【適用儀器】

  半自動的(de)酶標(biao)儀(yi)，如Thermo MK3，或者國產酶標(biao)儀(yi)。

【樣(yang)本要求(qiu)】

  樣本類型和采集

以下只是列出樣品采(cai)(cai)集的(de)一般指南(nan)。所有樣本(ben)采(cai)(cai)集過程中，不得使用(yong)疊氮鈉做為防腐劑。

1、細(xi)胞(bao)培養上(shang)清：4000rpm條件下離心20min，去(qu)除細(xi)胞(bao)顆粒(li)和聚合物，上(shang)清液(ye)保存在- 20℃以下，避免反(fan)復凍融。

2、血清(qing)：使用不(bu)含熱原和內毒素的試(shi)管，操作過程中避免(mian)任何細胞刺激，4000rpm條件下離心20min，小(xiao)心地分離出血清(qing)，保存(cun)在- 20℃以下，避免(mian)反復凍融。

3、血漿(jiang)(jiang)：肝素，EDTA，或(huo)檸檬酸(suan)鈉作為抗(kang)凝(ning)劑(ji)。在4000rpm條(tiao)件(jian)下(xia)，離(li)心20分(fen)鐘取上清，血漿(jiang)(jiang)保存在-20℃以下(xia)，避(bi)免反復凍融。

4、組織(zhi)勻(yun)(yun)漿(jiang)(jiang)：用預冷的PBS (0.01 M,pH=7.4)沖洗組織(zhi)，去除(chu)殘(can)留血液(ye)，稱(cheng)重后將(jiang)(jiang)組織(zhi)，剪碎。將(jiang)(jiang)剪碎的組織(zhi)與(yu)對(dui)應(ying)體(ti)(ti)(ti)積(ji)的PBS(一般按1: 9的重量體(ti)(ti)(ti)積(ji)比，比如1g的組織(zhi)樣(yang)品對(dui)應(ying)9 mL的PBS，具體(ti)(ti)(ti)體(ti)(ti)(ti)積(ji)可根據(ju)實驗需要適當調整，并(bing)做好記錄。推薦(jian)在(zai)PBS中加入蛋(dan)白(bai)酶抑(yi)制劑)加入玻璃勻(yun)(yun)漿(jiang)(jiang)器中，在(zai)冰上充分研磨(mo)。為(wei)了(le)進一步裂(lie)解組織(zhi)細胞，可以(yi)對(dui)勻(yun)(yun)漿(jiang)(jiang)液(ye)進行超(chao)聲破碎或(huo)反復凍融。最后將(jiang)(jiang)勻(yun)(yun)漿(jiang)(jiang)液(ye)5000×g離心 5-10分鐘，取(qu)上清(qing)檢測。

樣本保存和穩定(ding)性：

樣(yang)本(ben)在(zai)(zai)2-8℃條件下，可以儲(chu)存72h，或者在(zai)(zai)- 20℃儲(chu)存6個月。樣(yang)本(ben)收集后，不(bu)是一次(ci)檢(jian)測(ce)完，請按一次(ci)用量分裝凍(dong)存，避免反復凍(dong)融，使(shi)用時在(zai)(zai)室溫(wen)下解凍(dong)，確(que)保樣(yang)品均勻充分解凍(dong)。

【檢驗方法】

試劑準備(bei)

1、使用前，所有的組分都要至少復溫30min，確(que)保充分復溫到(dao)室溫。

2、濃縮洗(xi)滌液：從冰箱取出的濃縮洗(xi)滌液，會有結晶產(chan)生，這屬于正(zheng)常(chang)現(xian)象，水浴加(jia)熱使結晶溶(rong)解。濃縮洗滌液與蒸餾水，按1:20稀釋，即1份的濃縮洗滌液，添加19份的蒸餾水。

操作程序

1. 按前面說明書描述的方法，配制好試劑盒(he)各(ge)種組分的工作液(ye)。

2. 從鋁箔袋(dai)中取出所需板(ban)(ban)條，剩余的板(ban)(ban)條用(yong)自封(feng)袋(dai)密封(feng)放(fang)回冰箱(xiang)。設置(zhi)標準(zhun)品(pin)孔、空(kong)白孔和(he)樣本(ben)(ben)孔，標準(zhun)品(pin)孔各加不同濃度的標準(zhun)品(pin)50μL，空(kong)白孔不加，樣本(ben)(ben)孔加待測樣本(ben)(ben)50μL。

3. 除空(kong)白孔外，標準品孔和樣本孔，加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的(de)檢測(ce)抗原100μL。

4. 用(yong)封板(ban)膜(mo)蓋住反應板(ban)，37℃水(shui)浴(yu)鍋(guo)或(huo)恒溫(wen)箱溫(wen)育60min。

5. 揭開封板(ban)膜(mo)，棄去(qu)液(ye)體，吸(xi)水紙上拍(pai)(pai)干(gan)，每孔加(jia)(jia)滿洗(xi)滌(di)液(ye)，靜置20S，甩(shuai)去(qu)洗(xi)滌(di)液(ye)，吸(xi)水紙上拍(pai)(pai)干(gan)，如此(ci)重復5次(ci)。若使用自動洗(xi)板(ban)機，請按洗(xi)板(ban)機操作程序進(jin)行洗(xi)板(ban)，添(tian)加(jia)(jia)浸泡(pao)30s的程序，可(ke)以提高檢測的精度。洗(xi)板(ban)結束，加(jia)(jia)底(di)物前(qian)，要在干(gan)凈(jing)不(bu)掉(diao)屑的紙上，充分拍(pai)(pai)干(gan)反應板(ban)。

6. 將底(di)物A和B按1:1體積充(chong)分混(hun)合(he)，所有(you)孔中(zhong)加入底(di)物混(hun)合(he)液100μL。用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋(guo)或恒(heng)溫箱溫育15min。

7. 所有孔加入終止液50μL，在450波長的酶標(biao)儀上讀取(qu)各(ge)孔吸光度（OD值）。

【實(shi)驗結果(guo)計算】

檢測完成后(hou)，以標準品濃(nong)度(du)做為縱坐標，對應的(de)吸(xi)光度(du)（OD值）作(zuo)為橫坐標，利用(yong)計算機軟件，采用(yong)四參數(shu)Logistic曲線擬合（4-pl），創建標準曲線方程，通(tong)過樣本的(de)吸(xi)光度(du)（OD值），利用(yong)方程計算樣品的(de)濃(nong)度(du)值。

如果樣品被稀釋(shi)，通過(guo)上述方(fang)法測的(de)的(de)濃度(du)(du)值，要(yao)乘(cheng)以稀釋(shi)倍數，才是樣品的(de)最終濃度(du)(du)。

【檢驗方法的(de)局限(xian)性】

1、僅供科研使用(yong)，不得用(yong)于(yu)臨床診斷。

2、在試劑(ji)盒標(biao)示的有效期(qi)內使用(yong)，過(guo)期(qi)產品(pin)不得使用(yong)。

3、跟(gen)其(qi)他(ta)廠家(jia)的試劑(ji)盒或者組(zu)分不能混(hun)用。

4、使用試劑盒配套的(de)樣品稀釋液。

5、如果樣(yang)本(ben)值高于最高標(biao)準品濃度值，請將樣(yang)本(ben)適當稀(xi)釋后(hou)，再重新測定。

6、通過其他方法得(de)到的檢測結(jie)果，與本試劑盒測定結(jie)果不(bu)具有直接的可比性(xing)。

【產品性能指標】

1. 外觀和物理(li)檢(jian)查:試劑盒應(ying)(ying)組分齊(qi)全，內外包裝均應(ying)(ying)完(wan)整，標簽清晰(xi)，液體試劑無(wu)滲漏。各組分裝量不少于(yu)表(biao)1中要求(qiu)。

2. 線性: 用四參數Logistic曲線擬(ni)合（4-pl），在1 ng/mL – 16 ng/mL范圍內，劑(ji)量-反應曲線相(xiang)關系數（r）的絕(jue)對值應不低于0.9900。

3. 精密(mi)度

3.1分析內精密度:試劑盒質控品測定結果(guo)的變異系數（CV）應不大于15.0%。

3.2批間(jian)精密度:在三個不同批次產品(pin)之間(jian)，質控(kong)品(pin)測定結果的變異系數（CV）應不大于15.0%

4. 蕞低檢出(chu)限:蕞低檢測(ce)濃度小于0.1 ng/mL。

5. 質控品測定值: 每次檢測結果均應(ying)在允許范圍內(nei)。

【注意事項】

生物安全

1、檢測必須符(fu)合實驗室管理規范的(de)規定，嚴(yan)格防止交(jiao)叉污染，所有樣品、洗棄(qi)液和各種廢棄(qi)物都應按照(zhao)傳染物進行處(chu)置。

2、試劑盒(he)的液體組(zu)分中，含有proclin-300防腐劑，可能(neng)引起皮膚(fu)過(guo)敏反應，避免吸(xi)入煙霧與皮膚(fu)接觸。

3、底(di)物液對皮膚、眼睛和上呼吸(xi)(xi)道有刺(ci)激作用，避免吸(xi)(xi)入煙霧。戴上防(fang)護手套，實驗(yan)完成(cheng)后洗手。

技術提示

1、混合蛋白溶液時，避免起泡。

2、加校準(zhun)品(pin)與樣本時，每個校準(zhun)品(pin)濃度(du)和(he)樣本都要更(geng)換移液槍頭，公(gong)共組(zu)分(fen)應(ying)該懸臂加樣，避(bi)免交叉污(wu)染。

3、合適的溫(wen)育時間，和充分的洗滌步驟(zou)，是保證(zheng)實驗(yan)結果準確性的必要條件。

4、底物(wu)(wu)溶(rong)液為(wei)無(wu)色液體，保存過程中變為(wei)藍色，代表底物(wu)(wu)溶(rong)液已經失效，不得使用。

5、終止液(ye)(ye)加樣(yang)順(shun)序與底(di)物溶液(ye)(ye)加樣(yang)順(shun)序一(yi)致，加入(ru)終止液(ye)(ye)后，藍色底(di)物產物，會瞬間變為黃色。

6、實驗中，用剩的板條，應(ying)立即(ji)放回(hui)自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

7、所(suo)有(you)液體(ti)組分，使(shi)用前(qian)充分搖勻，嚴格(ge)按照說(shuo)明書(shu)標明的時(shi)間、加(jia)(jia)樣(yang)量(liang)及加(jia)(jia)樣(yang)順序(xu)進(jin)行溫(wen)育操作。

廢物處理

  所(suo)有(you)使(shi)用(yong)或未使(shi)用(yong)的(de)試劑(ji)，所(suo)有(you)污染(ran)性的(de)一次性材料，應當(dang)遵循傳染(ran)性或潛在(zai)傳染(ran)性產品(pin)的(de)處理(li)程序，每個實驗(yan)室都有(you)責(ze)任根據其實驗(yan)的(de)類型和危險性級別(bie)，進行(xing)廢(fei)物(wu)和污物(wu)的(de)處理(li)，同時(shi)要嚴格(ge)依照有(you)關規定對待所(suo)有(you)的(de)廢(fei)物(wu)和污物(wu)。

南京億迅生物科技有限公司(si)出品的各類ELISA試劑盒。產品質量穩定，價格實惠，在國內各科研院所和高校擁有良好的品譽。

該類產品還有小鼠孕酮（PROG）ELISA定量檢測試劑盒，小鼠組胺（HIS）ELISA定量檢測試劑盒，小鼠前列腺素（PG）ELISA定量檢測試劑盒，大鼠雌二醇（E2）ELISA定量檢測試劑盒，大鼠孕酮（PROG）ELISA定量檢測試劑盒等。

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