【產品名稱(cheng)】

通用名稱：小鼠組胺（HIS）ELISA定量檢測試劑盒

英文名稱：Mouse Histamine ELISA KIT

【包裝規格】

96T/48T

【預(yu)期用途】

僅供科研使用，定量檢測血清、血漿、細胞培養(yang)上清液中組胺（HIS）的濃(nong)度。

【檢驗原理】

本(ben)試(shi)劑盒采用競爭(zheng)法酶(mei)(mei)聯免(mian)疫吸(xi)附試(shi)驗（ELISA）。在(zai)預包(bao)被抗(kang)組(zu)(zu)胺（HIS）抗(kang)體（固相(xiang)抗(kang)體）的(de)微孔(kong)酶(mei)(mei)標(biao)(biao)板中(zhong)，加(jia)入小(xiao)鼠(shu) 組(zu)(zu)胺（HIS）校準(zhun)品(pin)和待(dai)測(ce)(ce)樣本(ben)，再加(jia)入HRP標(biao)(biao)記的(de)小(xiao)鼠(shu) 組(zu)(zu)胺（HIS）抗(kang)原(yuan)(yuan)（酶(mei)(mei)標(biao)(biao)抗(kang)原(yuan)(yuan)），經過(guo)溫育與充分洗滌，去除未結合(he)的(de)組(zu)(zu)分，在(zai)微孔(kong)板固相(xiang)表面(mian)形(xing)成固相(xiang)抗(kang)體-酶(mei)(mei)標(biao)(biao)抗(kang)原(yuan)(yuan)的(de)免(mian)疫復合(he)物。加(jia)底物A和B，底物在(zai)HRP催化下，產生(sheng)藍(lan)色(se)(se)產物，在(zai)終(zhong)止液(ye)（2M 硫酸）作(zuo)用下，最終(zhong)轉化為黃色(se)(se)，在(zai)酶(mei)(mei)標(biao)(biao)儀450nm波長上測(ce)(ce)定吸(xi)光(guang)度(du)（OD值(zhi)），吸(xi)光(guang)度(du)（OD值(zhi)）與待(dai)測(ce)(ce)樣品(pin)中(zhong)小(xiao)鼠(shu) 組(zu)(zu)胺（HIS）的(de)濃度(du)負相(xiang)關。擬合(he)校準(zhun)品(pin)曲線(xian)，可以計(ji)算出(chu)樣本(ben)中(zhong)小(xiao)鼠(shu) 組(zu)(zu)胺（HIS）的(de)濃度(du)。

【主要組成(cheng)成(cheng)分】

主要成分

標(biao)準品(pin)濃度依次為：16、8、4、2、1、0 ng/mL

本品必(bi)須按(an)照具(ju)有潛在(zai)的感(gan)染性進行(xing)處(chu)理，處(chu)理過程應當遵循(xun)通(tong)用的安全措施。

需要但未(wei)提供的材(cai)(cai)料及(ji)耗材(cai)(cai)

1、酶標(biao)儀

2、精(jing)密移液器及(ji)一次性吸頭

3、蒸餾水(shui)

4、洗(xi)瓶或者(zhe)自動洗(xi)板機

5、37℃水浴鍋或恒溫箱(xiang)

6、500ml量筒

7、無粉一次性乳(ru)膠(jiao)手套

【儲存條件及(ji)有(you)效期(qi)】

  1、2-8℃保(bao)存，切勿冷凍(dong)，有效期(qi)6個月。

  2、開封(feng)使用(yong)后，包被微孔板放(fang)入帶有干(gan)燥劑的自封(feng)袋中，密閉自封(feng)袋，并將全(quan)部(bu)試(shi)劑放(fang)回2-8℃冰箱。

  3、開封后，按照(zhao)建議(yi)的(de)條件(jian)保(bao)存，校準品、包被微孔板(ban)和(he)HRP標(biao)記抗體，有效期為14天(tian)，其他成分在標(biao)簽(qian)標(biao)明(ming)的(de)有效期內是(shi)穩定的(de)。

【適用儀器】

  半自動的(de)酶標(biao)儀，如Thermo MK3，或(huo)者國(guo)產酶標(biao)儀。

【樣本(ben)要求】

樣本類型和采集

以(yi)下只是列出樣(yang)品采集(ji)的一般指(zhi)南。所(suo)有樣(yang)本采集(ji)過程中，不得使用疊氮(dan)鈉做(zuo)為防腐(fu)劑。

1、細(xi)胞培養上(shang)清：4000rpm條(tiao)件下(xia)離心20min，去除細(xi)胞顆(ke)粒和聚(ju)合物，上(shang)清液(ye)保存在- 20℃以下(xia)，避免反復凍融。

2、血清(qing)：使用(yong)不含熱原和內(nei)毒素的試管，操作(zuo)過(guo)程中避免(mian)任何細胞刺激(ji)，4000rpm條件(jian)下離(li)心(xin)20min，小心(xin)地分離(li)出血清(qing)，保存(cun)在- 20℃以下，避免(mian)反復凍融。

3、血漿：肝素，EDTA，或檸檬酸鈉作為抗(kang)凝劑(ji)。在4000rpm條件下，離心20分鐘取上清，血漿保存(cun)在-20℃以下，避免反復凍融。

4、組(zu)織(zhi)勻漿：用預冷的(de)PBS (0.01 M,pH=7.4)沖洗組(zu)織(zhi)，去(qu)除殘(can)留血液，稱重(zhong)后(hou)將組(zu)織(zhi)，剪(jian)碎。將剪(jian)碎的(de)組(zu)織(zhi)與對應體(ti)積(ji)的(de)PBS(一般按1: 9的(de)重(zhong)量(liang)體(ti)積(ji)比(bi)，比(bi)如1g的(de)組(zu)織(zhi)樣品對應9 mL的(de)PBS，具體(ti)體(ti)積(ji)可(ke)根據實驗(yan)需要適當調整，并做好記錄。推薦在(zai)PBS中(zhong)加入蛋白酶抑制(zhi)劑)加入玻璃勻漿器中(zhong)，在(zai)冰上充分(fen)研(yan)磨。為了進(jin)一步裂解組(zu)織(zhi)細胞(bao)，可(ke)以對勻漿液進(jin)行超聲破碎或反復凍融(rong)。最后(hou)將勻漿液5000×g離心 5-10分(fen)鐘(zhong)，取上清檢(jian)測(ce)。

樣(yang)本保存(cun)和(he)穩定性

樣本(ben)在2-8℃條件下(xia)，可以儲存72h，或(huo)者在- 20℃儲存6個月。樣本(ben)收集后，不是一次檢(jian)測完，請按一次用(yong)量分(fen)裝凍存，避免反(fan)復凍融(rong)，使用(yong)時(shi)在室(shi)溫下(xia)解凍，確保樣品均勻充分(fen)解凍。

【檢驗方法(fa)】

試劑準備

1、使用前，所有(you)的組分(fen)都(dou)要至少復(fu)溫(wen)30min，確保充分(fen)復(fu)溫(wen)到(dao)室溫(wen)。

2、濃(nong)縮(suo)洗滌(di)(di)(di)液(ye)：從冰箱取出的(de)濃(nong)縮(suo)洗滌(di)(di)(di)液(ye)，會有結晶產生，這(zhe)屬于正常現象，水(shui)浴加(jia)(jia)熱使結晶溶解。濃(nong)縮(suo)洗滌(di)(di)(di)液(ye)與蒸餾水(shui)，按(an)1:20稀釋，即1份的(de)濃(nong)縮(suo)洗滌(di)(di)(di)液(ye)，添加(jia)(jia)19份的(de)蒸餾水(shui)。

操作程序

1. 按前面說明書描述的(de)方法，配制好試劑盒(he)各種組分(fen)的(de)工作液。

2. 從鋁箔袋(dai)中取出(chu)所需板條(tiao)，剩余的(de)(de)板條(tiao)用自(zi)封袋(dai)密封放回冰箱。設置標(biao)(biao)(biao)準品(pin)孔(kong)、空白孔(kong)和樣本(ben)孔(kong)，標(biao)(biao)(biao)準品(pin)孔(kong)各加不(bu)同濃度的(de)(de)標(biao)(biao)(biao)準品(pin)50μL，空白孔(kong)不(bu)加，樣本(ben)孔(kong)加待測(ce)樣本(ben)50μL。

3. 除空白孔(kong)外，標準品孔(kong)和(he)樣本孔(kong)，加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗原100μL。

4. 用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或(huo)恒(heng)溫箱溫育60min。

5. 揭(jie)開封板(ban)(ban)膜，棄去液(ye)體，吸(xi)水紙上拍干(gan)，每(mei)孔加滿洗滌液(ye)，靜置20S，甩去洗滌液(ye)，吸(xi)水紙上拍干(gan)，如此重(zhong)復(fu)5次。若使用(yong)自動(dong)洗板(ban)(ban)機，請按洗板(ban)(ban)機操(cao)作(zuo)程序(xu)(xu)進(jin)行(xing)洗板(ban)(ban)，添加浸泡30s的程序(xu)(xu)，可(ke)以提高(gao)檢測的精度。洗板(ban)(ban)結束，加底物前，要(yao)在干(gan)凈不掉屑的紙上，充分拍干(gan)反應板(ban)(ban)。

6. 將底物(wu)A和B按(an)1:1體積充分混合(he)，所有孔中加入底物(wu)混合(he)液100μL。用封板膜蓋住反(fan)應(ying)板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15min。

7. 所有孔加入終(zhong)止液50μL，在450波長的酶(mei)標儀上讀取各孔吸光度(du)（OD值）。

【實驗結果計算】

檢(jian)測完成(cheng)后，以標(biao)(biao)準品濃度(du)做為(wei)縱坐(zuo)標(biao)(biao)，對應的吸光(guang)度(du)（OD值）作為(wei)橫坐(zuo)標(biao)(biao)，利(li)用(yong)計(ji)算機軟件，采用(yong)四(si)參數Logistic曲線擬合（4-pl），創建標(biao)(biao)準曲線方(fang)(fang)程(cheng)，通過樣本(ben)的吸光(guang)度(du)（OD值），利(li)用(yong)方(fang)(fang)程(cheng)計(ji)算樣品的濃度(du)值。

如果樣品被稀釋，通(tong)過上述方法測的(de)的(de)濃(nong)度值，要乘以(yi)稀釋倍(bei)數，才是樣品的(de)最(zui)終濃(nong)度。

【檢驗(yan)方法的局(ju)限性】

1、僅供科研使用，不得用于臨床診斷(duan)。

2、在試劑盒標(biao)示(shi)的(de)有效(xiao)期內使用，過期產(chan)品不得(de)使用。

3、跟其他廠家的(de)試劑(ji)盒或者(zhe)組分不能混用。

4、使用試劑盒配套(tao)的(de)樣(yang)品稀釋液。

5、如(ru)果樣本(ben)值高(gao)于最高(gao)標(biao)準品濃(nong)度值，請將樣本(ben)適當稀釋(shi)后，再重(zhong)新測定。

6、通過其他(ta)方法得到的(de)檢測(ce)結(jie)(jie)果，與本試劑盒(he)測(ce)定結(jie)(jie)果不具有直接的(de)可(ke)比(bi)性。

【產品(pin)性能指標】

1. 外觀和物理檢查:試(shi)劑盒應組分齊全，內外包裝均應完整，標簽清晰(xi)，液(ye)體(ti)試(shi)劑無滲漏。各組分裝量不少(shao)于表1中要求(qiu)。

2. 線(xian)性: 用四參數Logistic曲線(xian)擬合（4-pl），在(zai)1 ng/mL – 16 ng/mL范(fan)圍內，劑(ji)量-反(fan)應曲線(xian)相(xiang)關系(xi)數（r）的絕對值(zhi)應不低于(yu)0.9900。

3. 精密度

3.1分析內(nei)精密度:試劑盒質控品測定結果(guo)的變異系(xi)數（CV）應不大于(yu)15.0%。

3.2批間(jian)精(jing)密(mi)度:在三個不同批次(ci)產品之(zhi)間(jian)，質控品測定結果的變異系數（CV）應不大于15.0%

4. 蕞低檢出限：蕞低檢測濃度小于0.1 ng/mL。

5. 質控品測(ce)定值(zhi): 每次(ci)檢測(ce)結(jie)果均應(ying)在允(yun)許范圍內。

【注意事項】

生(sheng)物安全

1、檢測必須(xu)符合實驗(yan)室(shi)管理規范(fan)的規定，嚴格防止交叉污染，所有樣品、洗棄液和(he)各種廢(fei)棄物都應按照傳(chuan)染物進行處置。

2、試(shi)劑盒的(de)液體(ti)組分中，含有(you)proclin-300防腐劑，可能引起(qi)皮膚過敏反應，避免吸入煙(yan)霧與皮膚接觸。

3、底(di)物液對皮(pi)膚、眼睛和上呼吸(xi)道有刺激作用，避免吸(xi)入煙霧。戴上防護手套，實驗完(wan)成后洗手。

技術提示

1、混合蛋白(bai)溶(rong)液(ye)時，避免(mian)起泡。

2、加校準(zhun)品(pin)與樣(yang)本時，每個校準(zhun)品(pin)濃度和樣(yang)本都要更換(huan)移液槍頭，公共組分應該懸(xuan)臂加樣(yang)，避免交(jiao)叉(cha)污(wu)染。

3、合適的(de)溫育時間，和(he)充分的(de)洗滌步驟(zou)，是保證(zheng)實驗結果準確性的(de)必要條件。

4、底(di)物(wu)溶(rong)(rong)液(ye)為無色液(ye)體(ti)，保(bao)存過程中(zhong)變(bian)為藍色，代表底(di)物(wu)溶(rong)(rong)液(ye)已經(jing)失效，不得使用。

5、終(zhong)止液加(jia)(jia)樣順序與(yu)底物(wu)溶液加(jia)(jia)樣順序一致，加(jia)(jia)入終(zhong)止液后，藍色底物(wu)產物(wu)，會(hui)瞬(shun)間變(bian)為黃(huang)色。

6、實驗中(zhong)，用剩(sheng)的(de)板條，應(ying)立即放回自封袋中(zhong)，密封（低溫干燥）保(bao)存。

7、所有(you)液體組分(fen)，使用(yong)前充(chong)分(fen)搖勻，嚴格按照說明書標明的時間、加樣(yang)量(liang)及加樣(yang)順序進行(xing)溫(wen)育操(cao)作(zuo)。

廢物處理

  所(suo)有(you)使用或未使用的試劑(ji)，所(suo)有(you)污(wu)染(ran)性(xing)的一(yi)次性(xing)材料，應當遵循傳(chuan)染(ran)性(xing)或潛(qian)在傳(chuan)染(ran)性(xing)產(chan)品的處理(li)程序(xu)，每個(ge)實(shi)驗(yan)室都有(you)責任(ren)根據其實(shi)驗(yan)的類型和(he)危險性(xing)級別，進行廢(fei)物(wu)和(he)污(wu)物(wu)的處理(li)，同時(shi)要嚴格依照有(you)關規定(ding)對待所(suo)有(you)的廢(fei)物(wu)和(he)污(wu)物(wu)。

南京億迅(xun)生(sheng)物科(ke)技有限公司出品的各類ELISA試劑盒。產品質量穩定，價格實惠，在國內各科研院所和高校擁有良好的品譽。

該類產品還有小鼠孕酮（PROG）ELISA定量檢測試劑盒，小鼠組胺（HIS）ELISA定量檢測試劑盒，小鼠前列腺素（PG）ELISA定量檢測試(shi)劑盒，小鼠(shu)白細胞介(jie)素1β（IL-1β）ELISA試(shi)劑盒等。

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