【產品名稱】

通用名稱：小鼠前列腺素（PG）ELISA定量檢測試劑盒

英文名(ming)稱：Mouse Prostaglandin ELISA KIT

【包裝規格】

96T/48T

【預(yu)期用途】

僅供科研使(shi)用，定量檢(jian)測(ce)血(xue)清(qing)、血(xue)漿、細胞培養(yang)上清(qing)液(ye)中前列腺素(su)（PG）的濃度。

【檢驗(yan)原(yuan)理】

本試劑盒采用競(jing)爭(zheng)法酶(mei)聯免疫吸附試驗（ELISA）。在(zai)預包被抗(kang)(kang)(kang)前列腺素(su)(su)（PG）抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)（固相抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)）的(de)微孔酶(mei)標板中，加(jia)(jia)入小(xiao)鼠(shu) 前列腺素(su)(su)（PG）校(xiao)(xiao)準(zhun)(zhun)品(pin)和待測樣本，再加(jia)(jia)入HRP標記的(de)小(xiao)鼠(shu) 前列腺素(su)(su)（PG）抗(kang)(kang)(kang)原（酶(mei)標抗(kang)(kang)(kang)原），經過溫育與充(chong)分(fen)洗滌(di)，去除未結合(he)的(de)組(zu)分(fen)，在(zai)微孔板固相表面形成(cheng)固相抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)-酶(mei)標抗(kang)(kang)(kang)原的(de)免疫復合(he)物(wu)。加(jia)(jia)底物(wu)A和B，底物(wu)在(zai)HRP催化(hua)下，產生藍色(se)產物(wu)，在(zai)終止液（2M 硫酸(suan)）作用下，最(zui)終轉化(hua)為(wei)黃(huang)色(se)，在(zai)酶(mei)標儀450nm波(bo)長(chang)上測定吸光度(du)（OD值(zhi)），吸光度(du)（OD值(zhi)）與待測樣品(pin)中小(xiao)鼠(shu) 前列腺素(su)(su)（PG）的(de)濃度(du)負相關。擬合(he)校(xiao)(xiao)準(zhun)(zhun)品(pin)曲(qu)線，可以計算出樣本中小(xiao)鼠(shu) 前列腺素(su)(su)（PG）的(de)濃度(du)。

【主要(yao)組成(cheng)成(cheng)分】

主要成分

標準品濃度依次(ci)為：800、400、200、100、50、0 pg/mL

本品必須按照具(ju)有潛在的感染(ran)性(xing)進行處(chu)理(li)，處(chu)理(li)過程(cheng)應當遵(zun)循通(tong)用的安全措施。

需要但(dan)未(wei)提供的材料及耗材

1、酶標儀(yi)

2、精密移液(ye)器及一次性吸(xi)頭

3、蒸餾(liu)水

4、洗(xi)瓶或者自動洗(xi)板機

5、37℃水浴鍋或恒溫箱

6、500ml量筒(tong)

7、無(wu)粉一(yi)次性乳膠手套

【儲存條件及有效期(qi)】

  1、2-8℃保存(cun)，切勿冷凍(dong)，有效期6個月。

  2、開(kai)封使用(yong)后，包被(bei)微孔板放入帶有(you)干燥劑(ji)的自(zi)封袋中，密(mi)閉自(zi)封袋，并將全部試(shi)劑(ji)放回2-8℃冰(bing)箱。

  3、開封后(hou)，按(an)照建(jian)議的條(tiao)件保存，校(xiao)準品、包被微孔板和HRP標(biao)記抗體，有效期(qi)為14天，其他成分(fen)在(zai)標(biao)簽標(biao)明的有效期(qi)內是穩定的。

【適(shi)用儀(yi)器】

  半自動的酶標(biao)儀，如Thermo MK3，或者(zhe)國(guo)產酶標(biao)儀。

【樣本(ben)要求(qiu)】

樣本類型和采集

以下只是(shi)列出樣品(pin)采(cai)集(ji)的一般指南。所有樣本(ben)采(cai)集(ji)過(guo)程中(zhong)，不得使用疊氮鈉做為防腐劑。

1、細(xi)胞(bao)培養(yang)上清：4000rpm條件下(xia)離心20min，去(qu)除細(xi)胞(bao)顆粒和聚合物，上清液保存(cun)在- 20℃以下(xia)，避(bi)免(mian)反復(fu)凍融。

2、血(xue)清：使用不含熱(re)原和內毒(du)素的試管，操作(zuo)過程中(zhong)避免任何(he)細(xi)胞刺激，4000rpm條件下離(li)心(xin)20min，小心(xin)地分離(li)出(chu)血(xue)清，保(bao)存(cun)在(zai)- 20℃以下，避免反復凍(dong)融(rong)。

3、血漿(jiang)：肝素，EDTA，或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在4000rpm條件下，離心(xin)20分鐘(zhong)取上清，血漿(jiang)保存在-20℃以下，避(bi)免(mian)反復凍融。

4、組(zu)(zu)織勻漿(jiang)：用(yong)預冷的PBS (0.01 M,pH=7.4)沖(chong)洗組(zu)(zu)織，去除殘留血液(ye)，稱重后將(jiang)(jiang)組(zu)(zu)織，剪(jian)(jian)碎。將(jiang)(jiang)剪(jian)(jian)碎的組(zu)(zu)織與對應體(ti)積的PBS(一(yi)般按1: 9的重量體(ti)積比，比如1g的組(zu)(zu)織樣品對應9 mL的PBS，具(ju)體(ti)體(ti)積可根(gen)據(ju)實驗需要適(shi)當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入(ru)蛋白酶抑(yi)制劑(ji))加入(ru)玻璃勻漿(jiang)器(qi)中，在冰(bing)上充分研磨(mo)。為了(le)進一(yi)步(bu)裂解組(zu)(zu)織細胞，可以對勻漿(jiang)液(ye)進行超(chao)聲(sheng)破(po)碎或(huo)反(fan)復凍融。最后將(jiang)(jiang)勻漿(jiang)液(ye)5000×g離心 5-10分鐘，取上清檢測。

樣本保存和穩定性

樣(yang)本在2-8℃條件(jian)下(xia)，可以儲(chu)存72h，或(huo)者在- 20℃儲(chu)存6個月(yue)。樣(yang)本收集后，不是(shi)一(yi)次檢測完，請(qing)按一(yi)次用(yong)量分裝凍(dong)存，避免(mian)反(fan)復凍(dong)融，使用(yong)時在室溫下(xia)解凍(dong)，確保樣(yang)品均(jun)勻(yun)充分解凍(dong)。

【檢驗(yan)方法(fa)】

試劑準備(bei)

1、使用前，所有的組分都要至少復溫30min，確保(bao)充(chong)分復溫到室(shi)溫。

2、濃縮(suo)洗(xi)滌液(ye)(ye)：從冰箱取出的濃縮(suo)洗(xi)滌液(ye)(ye)，會有(you)結晶(jing)產生，這屬于正常(chang)現象，水(shui)浴加(jia)熱使(shi)結晶(jing)溶(rong)解。濃縮(suo)洗(xi)滌液(ye)(ye)與蒸餾水(shui)，按(an)1:20稀釋，即1份的濃縮(suo)洗(xi)滌液(ye)(ye)，添(tian)加(jia)19份的蒸餾水(shui)。

操作程(cheng)序(xu)

1. 按前面說明書描述的方(fang)法，配制好試劑(ji)盒各種組分的工(gong)作(zuo)液。

2. 從(cong)鋁(lv)箔(bo)袋中取出(chu)所需(xu)板條，剩余(yu)的(de)板條用自封(feng)袋密封(feng)放回冰箱。設置標準(zhun)品孔、空白孔和樣(yang)本(ben)孔，標準(zhun)品孔各加不同濃(nong)度的(de)標準(zhun)品50μL，空白孔不加，樣(yang)本(ben)孔加待測樣(yang)本(ben)50μL。

3. 除空白(bai)孔(kong)外(wai)，標準品孔(kong)和樣本孔(kong)，加入辣根過氧化物(wu)酶（HRP）標記的檢測(ce)抗原100μL。

4. 用封(feng)板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 揭開封板(ban)膜，棄去液體，吸(xi)水紙上拍(pai)干，每孔加滿(man)洗滌(di)液，靜(jing)置20S，甩去洗滌(di)液，吸(xi)水紙上拍(pai)干，如此重復(fu)5次。若使用自動洗板(ban)機，請按洗板(ban)機操作程(cheng)序進(jin)行洗板(ban)，添(tian)加浸泡30s的(de)程(cheng)序，可以提高檢(jian)測的(de)精度。洗板(ban)結束，加底(di)物(wu)前，要在干凈不掉屑的(de)紙上，充分拍(pai)干反應板(ban)。

6. 將底(di)物(wu)A和B按1:1體(ti)積充分混合，所有孔中(zhong)加(jia)入底(di)物(wu)混合液100μL。用封(feng)板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15min。

7. 所有孔(kong)加入終止液(ye)50μL，在450波(bo)長的(de)酶標儀上(shang)讀取各孔(kong)吸(xi)光度(du)（OD值）。

【實驗(yan)結果計算】

檢測完成后，以標(biao)準品濃(nong)度(du)做(zuo)為(wei)縱(zong)坐標(biao)，對應的(de)吸(xi)光(guang)度(du)（OD值）作為(wei)橫(heng)坐標(biao)，利用計(ji)算機軟(ruan)件(jian)，采用四(si)參數(shu)Logistic曲線擬合（4-pl），創建標(biao)準曲線方(fang)程(cheng)(cheng)，通過樣本(ben)的(de)吸(xi)光(guang)度(du)（OD值），利用方(fang)程(cheng)(cheng)計(ji)算樣品的(de)濃(nong)度(du)值。

如果樣品被稀釋，通(tong)過上述方(fang)法測的(de)的(de)濃(nong)度值，要(yao)乘以稀釋倍數，才是樣品的(de)最終(zhong)濃(nong)度。

【檢驗方法的局限性】

1、僅供科研(yan)使(shi)用(yong)，不得用(yong)于臨床診斷。

2、在(zai)試劑盒標(biao)示的有效期內使(shi)用，過期產品不得使(shi)用。

3、跟(gen)其他廠家的試(shi)劑盒或者組分不能(neng)混用(yong)。

4、使用試(shi)劑盒配套的樣品稀(xi)釋液。

5、如果樣本值高于最高標準品(pin)濃(nong)度值，請將樣本適當稀釋后，再(zai)重(zhong)新測定。

6、通過其他方法得(de)到的檢測結果(guo)，與(yu)本試(shi)劑盒(he)測定結果(guo)不(bu)具有直接的可比性。

【產品性能指標】

1. 外觀和物(wu)理檢查:試劑盒(he)應組分齊全，內外包裝(zhuang)均(jun)應完整，標簽清晰，液(ye)體試劑無(wu)滲(shen)漏。各(ge)組分裝(zhuang)量不少于表1中要(yao)求。

2. 線性: 用(yong)四參數(shu)Logistic曲線擬合（4-pl），在50 pg/mL – 800 pg/mL范圍內，劑(ji)量(liang)-反應曲線相(xiang)關系數(shu)（r）的絕對值(zhi)應不低于0.9900。

3. 精密度

3.1分(fen)析內精密(mi)度:試劑盒質控品測定(ding)結果(guo)的(de)變異系數（CV）應不(bu)大于15.0%。

3.2批(pi)間精密度:在(zai)三(san)個不同批(pi)次(ci)產品(pin)之間，質控(kong)品(pin)測定結果的變異系數（CV）應(ying)不大于15.0%

4. 蕞低檢出限:蕞(zui)低檢測濃度小于1.0 pg/mL。

5. 質控品測定值: 每次檢測結果(guo)均(jun)應在允許范圍內(nei)。

【注意事項】

生物安全

1、檢測(ce)必須符(fu)合實驗室管理規范的規定，嚴格(ge)防止交叉污染，所有(you)樣品、洗棄液(ye)和各(ge)種廢棄物都應按照傳染物進行處(chu)置。

2、試劑(ji)(ji)盒的(de)液體組分中，含有(you)proclin-300防腐劑(ji)(ji)，可能(neng)引(yin)起皮膚(fu)過敏反應，避免(mian)吸入(ru)煙霧與皮膚(fu)接(jie)觸。

3、底物液對皮膚、眼睛和上呼吸道(dao)有刺(ci)激(ji)作(zuo)用，避免吸入(ru)煙(yan)霧。戴上防(fang)護(hu)手套，實驗完成(cheng)后洗手。

技術提(ti)示(shi)

1、混合蛋(dan)白溶液時，避免起泡。

2、加(jia)校準品(pin)與樣(yang)(yang)本(ben)時，每個校準品(pin)濃度和樣(yang)(yang)本(ben)都要更(geng)換移液槍頭，公共組分應該懸(xuan)臂(bei)加(jia)樣(yang)(yang)，避免(mian)交叉污染。

3、合適的溫育(yu)時(shi)間(jian)，和充分的洗滌步驟，是保證實(shi)驗結果準確性的必(bi)要條件。

4、底(di)(di)物溶(rong)液(ye)為(wei)無色(se)液(ye)體(ti)，保(bao)存過程中變為(wei)藍色(se)，代(dai)表底(di)(di)物溶(rong)液(ye)已經失效，不得使用。

5、終(zhong)(zhong)止液加樣順(shun)序與底物溶液加樣順(shun)序一致，加入終(zhong)(zhong)止液后(hou)，藍(lan)色底物產物，會瞬間變(bian)為黃(huang)色。

6、實驗中(zhong)，用剩(sheng)的板條，應立即放回自封袋(dai)中(zhong)，密封（低溫干(gan)燥）保存(cun)。

7、所有液(ye)體組分，使(shi)用前充(chong)分搖(yao)勻，嚴格按(an)照說(shuo)明書標(biao)明的時間、加樣量(liang)及加樣順序進行溫育操作。

廢物處理(li)

  所(suo)有(you)(you)使用(yong)(yong)或未使用(yong)(yong)的(de)(de)(de)(de)試(shi)劑(ji)，所(suo)有(you)(you)污染(ran)性(xing)的(de)(de)(de)(de)一次性(xing)材料，應當遵循(xun)傳(chuan)染(ran)性(xing)或潛(qian)在傳(chuan)染(ran)性(xing)產品的(de)(de)(de)(de)處(chu)理程序，每個實驗室(shi)都有(you)(you)責(ze)任(ren)根據其實驗的(de)(de)(de)(de)類(lei)型和危險性(xing)級(ji)別，進行廢物(wu)(wu)和污物(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)處(chu)理，同時(shi)要嚴格依照(zhao)有(you)(you)關規(gui)定(ding)對待所(suo)有(you)(you)的(de)(de)(de)(de)廢物(wu)(wu)和污物(wu)(wu)。

小鼠前列腺素（PG）ELISA定量檢測試劑盒

南京億(yi)迅生物科技有限公司(si)出品的各類ELISA試劑盒。產品質量穩定，價格實惠，在國內各科研院所和高校擁有良好的品譽。

該類產(chan)品還有小(xiao)鼠白細(xi)胞介素(su)4（IL-4）ELISA試(shi)劑盒，小(xiao)鼠白細胞介素5（IL-5）ELISA試劑盒，小鼠沉默調節蛋白1（SIRT1）ELISA試劑盒，小鼠聚(ju)(ADP核糖(tang))聚合酶(mei)1（PARP1）ELISA試劑(ji)盒(he)，大鼠白細胞介素1β（IL-1β）ELISA試劑盒等(deng)。

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