【產品名稱】

通用名稱：大鼠雌二醇（E2）ELISA定量檢測試劑盒

英文名(ming)稱：Rat Estradiol ELISA KIT

【包裝規格】

96T/48T

【預期(qi)用途】

僅供(gong)科研使(shi)用，定量檢測血清、血漿、細胞培養上清液中雌二醇(chun)（E2）的濃(nong)度。

【檢驗原理(li)】

本(ben)試(shi)(shi)劑盒采用競爭法(fa)酶(mei)聯免(mian)疫吸(xi)附試(shi)(shi)驗（ELISA）。在預包被抗雌(ci)二醇（E2）抗體(ti)(ti)（固(gu)(gu)(gu)相抗體(ti)(ti)）的(de)(de)微孔酶(mei)標(biao)(biao)板中(zhong)，加入大(da)鼠 雌(ci)二醇（E2）校準品(pin)和待測樣本(ben)，再加入HRP標(biao)(biao)記的(de)(de)大(da)鼠 雌(ci)二醇（E2）抗原(yuan)（酶(mei)標(biao)(biao)抗原(yuan)），經過溫育與(yu)充分(fen)洗滌(di)，去(qu)除未(wei)結(jie)合的(de)(de)組(zu)分(fen)，在微孔板固(gu)(gu)(gu)相表面(mian)形成固(gu)(gu)(gu)相抗體(ti)(ti)-酶(mei)標(biao)(biao)抗原(yuan)的(de)(de)免(mian)疫復合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，產(chan)(chan)生(sheng)藍色(se)產(chan)(chan)物，在終止液（2M 硫酸）作用下，最終轉化為黃色(se)，在酶(mei)標(biao)(biao)儀450nm波長上測定(ding)吸(xi)光度(du)(du)(du)（OD值），吸(xi)光度(du)(du)(du)（OD值）與(yu)待測樣品(pin)中(zhong)大(da)鼠 雌(ci)二醇（E2）的(de)(de)濃度(du)(du)(du)負相關(guan)。擬合校準品(pin)曲線，可以計(ji)算出樣本(ben)中(zhong)大(da)鼠 雌(ci)二醇（E2）的(de)(de)濃度(du)(du)(du)。

【主要組成成分】

主要成分

標準品(pin)濃度依次為：64、32、16、8、4、0 pmol/L

本品必(bi)須(xu)按(an)照(zhao)具有潛在的感染性進行處理，處理過(guo)程應當遵循通用(yong)的安全措施。

需要但(dan)未(wei)提供(gong)的材(cai)料及耗材(cai)

1、酶標儀

2、精密移液器及一次性吸(xi)頭(tou)

3、蒸餾水

4、洗(xi)瓶或者(zhe)自動洗(xi)板(ban)機

5、37℃水(shui)浴鍋或恒溫箱

6、500ml量筒

7、無粉一(yi)次性乳膠手套(tao)

【儲(chu)存條件及有效期(qi)】

  1、2-8℃保存，切(qie)勿冷凍，有(you)效期6個(ge)月。

  2、開封(feng)使(shi)用后，包(bao)被微(wei)孔板(ban)放(fang)入帶有干燥劑(ji)的自封(feng)袋(dai)中(zhong)，密(mi)閉自封(feng)袋(dai)，并將全部(bu)試劑(ji)放(fang)回2-8℃冰箱。

  3、開封后(hou)，按照建(jian)議的條(tiao)件保存(cun)，校準品、包被微(wei)孔板和HRP標記抗(kang)體(ti)，有效期為14天，其他(ta)成分在標簽標明的有效期內(nei)是穩定的。

【適用儀器】

  半自動的酶(mei)標(biao)儀，如Thermo MK3，或者國產酶(mei)標(biao)儀。

【樣本要求】

樣本類型和采集

以下只是列(lie)出(chu)樣(yang)品(pin)采集的一般指南。所(suo)有樣(yang)本采集過程(cheng)中(zhong)，不得使用(yong)疊氮鈉做為防腐劑。

1、細胞培養上(shang)清：4000rpm條件下(xia)離心20min，去(qu)除(chu)細胞顆粒和聚(ju)合(he)物，上(shang)清液保存在- 20℃以下(xia)，避免反復凍融。

2、血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避(bi)免(mian)(mian)任何細胞刺激，4000rpm條件下離心(xin)20min，小心(xin)地分離出血清，保存在- 20℃以(yi)下，避(bi)免(mian)(mian)反復凍融。

3、血漿：肝(gan)素，EDTA，或檸檬酸(suan)鈉作為抗凝劑。在4000rpm條件下(xia)，離心20分鐘取上清，血漿保存(cun)在-20℃以下(xia)，避免反(fan)復(fu)凍融。

4、組(zu)(zu)(zu)織勻漿(jiang)(jiang)：用預冷(leng)的(de)PBS (0.01 M,pH=7.4)沖洗組(zu)(zu)(zu)織，去(qu)除殘留血液，稱重(zhong)后(hou)將組(zu)(zu)(zu)織，剪碎(sui)。將剪碎(sui)的(de)組(zu)(zu)(zu)織與對(dui)應體積的(de)PBS(一般按1: 9的(de)重(zhong)量體積比(bi)，比(bi)如1g的(de)組(zu)(zu)(zu)織樣品對(dui)應9 mL的(de)PBS，具體體積可根據(ju)實驗需要適當調整，并做好記(ji)錄。推薦(jian)在PBS中加(jia)入(ru)(ru)蛋白酶抑(yi)制劑)加(jia)入(ru)(ru)玻璃勻漿(jiang)(jiang)器中，在冰上充分研磨。為了進一步裂解組(zu)(zu)(zu)織細胞(bao)，可以對(dui)勻漿(jiang)(jiang)液進行超聲破碎(sui)或反(fan)復凍融。最后(hou)將勻漿(jiang)(jiang)液5000×g離心(xin) 5-10分鐘，取(qu)上清檢測(ce)。

樣(yang)本保存和穩定性

樣(yang)本在2-8℃條件下，可(ke)以儲(chu)(chu)存72h，或者在- 20℃儲(chu)(chu)存6個月。樣(yang)本收集(ji)后，不是一次(ci)檢測完(wan)，請按一次(ci)用量分裝凍(dong)存，避免反復凍(dong)融，使用時(shi)在室溫下解凍(dong)，確保樣(yang)品均勻充分解凍(dong)。

【檢驗(yan)方法(fa)】

試(shi)劑準備

1、使用前，所有(you)的(de)組(zu)分(fen)都要至(zhi)少(shao)復(fu)溫30min，確保充分(fen)復(fu)溫到(dao)室(shi)溫。

2、濃(nong)(nong)縮(suo)(suo)洗(xi)(xi)滌(di)液：從冰箱取出(chu)的(de)(de)濃(nong)(nong)縮(suo)(suo)洗(xi)(xi)滌(di)液，會有結(jie)(jie)晶產生(sheng)，這屬(shu)于正常現(xian)象，水浴加熱使結(jie)(jie)晶溶解。濃(nong)(nong)縮(suo)(suo)洗(xi)(xi)滌(di)液與蒸(zheng)(zheng)餾(liu)水，按1:20稀(xi)釋，即1份的(de)(de)濃(nong)(nong)縮(suo)(suo)洗(xi)(xi)滌(di)液，添加19份的(de)(de)蒸(zheng)(zheng)餾(liu)水。

操作程序

1. 按前面說(shuo)明書描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。

2. 從鋁(lv)箔袋中取(qu)出所需板條(tiao)，剩(sheng)余(yu)的板條(tiao)用自(zi)封(feng)袋密封(feng)放回冰箱。設置標準(zhun)品(pin)孔(kong)(kong)、空白孔(kong)(kong)和(he)樣(yang)本孔(kong)(kong)，標準(zhun)品(pin)孔(kong)(kong)各加不同濃(nong)度的標準(zhun)品(pin)50μL，空白孔(kong)(kong)不加，樣(yang)本孔(kong)(kong)加待(dai)測樣(yang)本50μL。

3. 除空白孔外，標準品孔和樣(yang)本孔，加入(ru)辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測(ce)抗原100μL。

4. 用封(feng)板(ban)膜蓋住(zhu)反應(ying)板(ban)，37℃水(shui)浴鍋或恒溫(wen)箱(xiang)溫(wen)育60min。

5. 揭開封板(ban)膜，棄(qi)去(qu)液(ye)體(ti)，吸(xi)(xi)水紙上(shang)拍(pai)(pai)干(gan)，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗(xi)(xi)滌液(ye)，靜置(zhi)20S，甩(shuai)去(qu)洗(xi)(xi)滌液(ye)，吸(xi)(xi)水紙上(shang)拍(pai)(pai)干(gan)，如(ru)此(ci)重復5次(ci)。若(ruo)使用(yong)自動(dong)洗(xi)(xi)板(ban)機(ji)，請按洗(xi)(xi)板(ban)機(ji)操(cao)作程序進行洗(xi)(xi)板(ban)，添加(jia)浸(jin)泡30s的程序，可(ke)以提(ti)高檢測的精度。洗(xi)(xi)板(ban)結束，加(jia)底物前(qian)，要在干(gan)凈(jing)不掉屑的紙上(shang)，充(chong)分拍(pai)(pai)干(gan)反應板(ban)。

6. 將底物(wu)A和(he)B按1:1體積充(chong)分混合，所有孔中加入底物(wu)混合液100μL。用封板(ban)膜蓋住反應板(ban)，37℃水浴鍋或(huo)恒溫箱溫育15min。

7. 所有孔加入終止液50μL，在450波(bo)長的酶標儀上(shang)讀(du)取各孔吸光(guang)度（OD值(zhi)）。

【實驗結(jie)果(guo)計算】

檢測(ce)完成后(hou)，以(yi)標準品(pin)(pin)濃(nong)度做為縱坐標，對應的吸光度（OD值(zhi)）作為橫坐標，利用(yong)計算機軟件，采用(yong)四參數Logistic曲線擬合（4-pl），創建標準曲線方(fang)程(cheng)，通過樣本的吸光度（OD值(zhi)），利用(yong)方(fang)程(cheng)計算樣品(pin)(pin)的濃(nong)度值(zhi)。

如果樣品(pin)(pin)被稀(xi)釋(shi)，通(tong)過上述方法測的的濃度(du)值，要(yao)乘以(yi)稀(xi)釋(shi)倍數，才是樣品(pin)(pin)的最終濃度(du)。

【檢(jian)驗(yan)方法的局(ju)限性】

1、僅供科研使用(yong)，不(bu)得用(yong)于臨(lin)床診斷。

2、在試(shi)劑盒標示的有效期(qi)(qi)內使用，過期(qi)(qi)產品(pin)不(bu)得使用。

3、跟(gen)其他廠家的試劑(ji)盒或者組分不能(neng)混用。

4、使用(yong)試劑盒配套的樣品(pin)稀釋(shi)液(ye)。

5、如(ru)果樣本值高于最高標準(zhun)品濃度(du)值，請將(jiang)樣本適當(dang)稀釋(shi)后，再重新測定(ding)。

6、通過其他(ta)方法(fa)得(de)到的檢測(ce)結果(guo)，與(yu)本試劑盒測(ce)定結果(guo)不具(ju)有直接(jie)的可比性。

【產品性能指標】

1. 外(wai)觀和物理檢查:試劑盒應組分齊(qi)全，內外(wai)包裝均應完(wan)整，標(biao)簽清晰，液體試劑無滲漏。各組分裝量不少于表1中要求。

2. 線(xian)性: 用(yong)四(si)參數(shu)Logistic曲線(xian)擬合（4-pl），在4 pmol/L – 64 pmol/L范圍內(nei)，劑量-反應(ying)曲線(xian)相關(guan)系數(shu)（r）的絕對(dui)值應(ying)不低于(yu)0.9900。

3. 精密度

3.1分析內精(jing)密度:試劑盒質控(kong)品測(ce)定結果的變異(yi)系數（CV）應不(bu)大于15.0%。

3.2批間精密度:在三個不同批次產品之間，質(zhi)控品測定(ding)結果的(de)變異系(xi)數（CV）應不大于15.0%

4.  蕞低檢出限:蕞低檢測濃度小于0.1 pmol/L。

5.  質控品測定值(zhi): 每次檢測結(jie)果均應在(zai)允許范圍內。

【注意事項】

生物安全

1、檢(jian)測必(bi)須符合實驗室管理(li)規(gui)范的(de)規(gui)定(ding)，嚴(yan)格防止交叉(cha)污染，所有樣品、洗棄(qi)液和各種廢(fei)棄(qi)物都應按照傳染物進行(xing)處置。

2、試(shi)劑(ji)盒(he)的液體組(zu)分中，含有proclin-300防(fang)腐劑(ji)，可能引起皮膚過(guo)敏反應，避免吸入煙霧(wu)與皮膚接觸。

3、底物(wu)液對皮膚、眼睛和上(shang)(shang)呼吸(xi)道有刺(ci)激作用，避免吸(xi)入(ru)煙霧。戴上(shang)(shang)防護手(shou)套，實驗完成后洗手(shou)。

技術(shu)提(ti)示(shi)

1、混合(he)蛋(dan)白溶液時，避免起泡。

2、加(jia)校(xiao)準(zhun)品(pin)與樣本時，每個(ge)校(xiao)準(zhun)品(pin)濃度和(he)樣本都要更換移液(ye)槍頭(tou)，公共組分應該懸臂加(jia)樣，避(bi)免交叉污染。

3、合(he)適(shi)的(de)溫(wen)育時間，和充(chong)分的(de)洗(xi)滌步驟，是保證實驗結果準(zhun)確性的(de)必要條件。

4、底物溶液為(wei)(wei)無色(se)(se)液體，保存過程(cheng)中(zhong)變為(wei)(wei)藍色(se)(se)，代表底物溶液已經失效(xiao)，不得(de)使用。

5、終(zhong)止液(ye)加(jia)(jia)樣順(shun)序與底(di)物(wu)溶液(ye)加(jia)(jia)樣順(shun)序一致，加(jia)(jia)入終(zhong)止液(ye)后，藍(lan)色(se)底(di)物(wu)產(chan)物(wu)，會瞬間(jian)變(bian)為黃色(se)。

6、實驗中，用剩的板條，應立即放回自封袋中，密封（低溫(wen)干燥）保存(cun)。

7、所有液體(ti)組分，使用前充(chong)分搖勻(yun)，嚴格按照說(shuo)明書標明的(de)時間、加樣(yang)量及加樣(yang)順序進(jin)行溫育操作。

廢物處(chu)理(li)

  所(suo)有(you)(you)使(shi)(shi)用或未使(shi)(shi)用的(de)(de)試劑，所(suo)有(you)(you)污染(ran)性的(de)(de)一次性材料，應當(dang)遵循(xun)傳染(ran)性或潛在傳染(ran)性產(chan)品的(de)(de)處理程序，每(mei)個實驗室(shi)都有(you)(you)責任根據其實驗的(de)(de)類型和(he)危險性級別，進行廢物和(he)污物的(de)(de)處理，同時要嚴格依照有(you)(you)關規定(ding)對待(dai)所(suo)有(you)(you)的(de)(de)廢物和(he)污物。

南京億迅生物科技(ji)有限公(gong)司出品的各類ELISA試劑盒。產品質量穩定，價格實惠，在國內各科研院所和高校擁有良好的品譽。

該類產品還有大鼠白(bai)細胞介素6（IL-6）ELISA試劑盒，大鼠腫瘤(liu)壞死因子α（TNF-α）ELISA試劑盒，大鼠腫瘤壞死因子α（TNF-α）ELISA試劑盒，小鼠孕酮（PROG）ELISA定量檢測試劑盒，大鼠雌二醇（E2）ELISA定量檢測試劑盒等。

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