【產品(pin)名稱】

通用名稱：大鼠孕酮（PROG）ELISA定量檢測試劑盒

英文(wen)名稱：Rat Progesterone ELISA KIT

【包裝(zhuang)規(gui)格】

96T/48T

【預期用途(tu)】

僅(jin)供科研使(shi)用，定量檢測血清(qing)、血漿、細胞培養上清(qing)液中(zhong)孕酮（PROG）的(de)濃度。

【檢(jian)驗原理】

本(ben)試劑盒采用競爭法酶聯免疫(yi)吸(xi)附試驗（ELISA）。在預包被抗孕(yun)酮(tong)（PROG）抗體（固相抗體）的(de)微(wei)孔(kong)酶標(biao)板(ban)中，加入大鼠 孕(yun)酮(tong)（PROG）校準(zhun)品和待測(ce)樣(yang)本(ben)，再(zai)加入HRP標(biao)記的(de)大鼠 孕(yun)酮(tong)（PROG）抗原(yuan)（酶標(biao)抗原(yuan)），經過溫育與充(chong)分洗滌(di)，去除未(wei)結合(he)的(de)組分，在微(wei)孔(kong)板(ban)固相表面形成固相抗體-酶標(biao)抗原(yuan)的(de)免疫(yi)復合(he)物。加底物A和B，底物在HRP催化(hua)下，產生藍色(se)產物，在終止(zhi)液（2M 硫酸）作用下，最(zui)終轉化(hua)為黃色(se)，在酶標(biao)儀(yi)450nm波長(chang)上測(ce)定吸(xi)光度(du)(du)(du)（OD值），吸(xi)光度(du)(du)(du)（OD值）與待測(ce)樣(yang)品中大鼠 孕(yun)酮(tong)（PROG）的(de)濃度(du)(du)(du)負(fu)相關。擬合(he)校準(zhun)品曲線(xian)，可以計算(suan)出(chu)樣(yang)本(ben)中大鼠 孕(yun)酮(tong)（PROG）的(de)濃度(du)(du)(du)。

【主(zhu)要(yao)組(zu)成(cheng)成(cheng)分】

主要成分(fen)

標準品濃度依次為：16、8、4、2、1、0 ng/mL

本品必須按(an)照具有潛(qian)在(zai)的感染性進行(xing)處(chu)理，處(chu)理過程應(ying)當(dang)遵循通(tong)用的安(an)全措施。

需要但未提供(gong)的(de)材(cai)料及耗材(cai)

1、酶(mei)標儀(yi)

2、精密移液器及一次性吸頭

3、蒸餾水

4、洗(xi)瓶或者自(zi)動洗(xi)板機

5、37℃水浴鍋或恒溫箱

6、500ml量筒

7、無粉一(yi)次性乳膠手套

【儲存條件(jian)及有效期】

  1、2-8℃保(bao)存(cun)，切勿冷凍，有效期6個月。

  2、開(kai)封使(shi)用(yong)后，包(bao)被(bei)微孔板(ban)放入(ru)帶有干燥劑(ji)的自封袋中，密閉自封袋，并將全部試劑(ji)放回2-8℃冰箱(xiang)。

  3、開(kai)封后，按照建議(yi)的條件保存，校準品、包被微孔板(ban)和HRP標記抗體，有效期(qi)(qi)為(wei)14天，其他成分(fen)在標簽標明的有效期(qi)(qi)內是穩定的。

【適用儀器】

  半自動(dong)的酶標(biao)儀(yi)，如Thermo MK3，或者國產(chan)酶標(biao)儀(yi)。

【樣本要求】

樣本類(lei)型和采集

以下只是列出樣(yang)品(pin)采(cai)集的一般指(zhi)南。所有樣(yang)本采(cai)集過(guo)程(cheng)中，不得使(shi)用疊氮鈉(na)做(zuo)為防腐(fu)劑。

1、細胞(bao)培養上清：4000rpm條件下(xia)離心20min，去除細胞(bao)顆粒和(he)聚合物，上清液保(bao)存在- 20℃以下(xia)，避免(mian)反復凍融。

2、血清(qing)：使用不含熱原和內(nei)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xi)胞刺激(ji)，4000rpm條件下(xia)離心20min，小心地分(fen)離出血清(qing)，保存在- 20℃以下(xia)，避免反復凍融。

3、血漿：肝素，EDTA，或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在4000rpm條(tiao)件下，離心20分鐘取(qu)上清，血漿保存在-20℃以下，避免反復凍融。

4、組(zu)(zu)(zu)織(zhi)勻(yun)漿(jiang)(jiang)：用(yong)預冷的(de)(de)PBS (0.01 M,pH=7.4)沖洗組(zu)(zu)(zu)織(zhi)，去(qu)除殘留(liu)血液，稱重后將(jiang)組(zu)(zu)(zu)織(zhi)，剪碎。將(jiang)剪碎的(de)(de)組(zu)(zu)(zu)織(zhi)與(yu)對應體(ti)(ti)積(ji)的(de)(de)PBS(一般按1: 9的(de)(de)重量體(ti)(ti)積(ji)比，比如1g的(de)(de)組(zu)(zu)(zu)織(zhi)樣品(pin)對應9 mL的(de)(de)PBS，具體(ti)(ti)體(ti)(ti)積(ji)可根據實驗需要適當(dang)調(diao)整，并做好記(ji)錄。推薦在PBS中(zhong)加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻(yun)漿(jiang)(jiang)器中(zhong)，在冰上充(chong)分研磨。為(wei)了進一步裂解組(zu)(zu)(zu)織(zhi)細(xi)胞，可以對勻(yun)漿(jiang)(jiang)液進行超聲破(po)碎或反復凍(dong)融。最后將(jiang)勻(yun)漿(jiang)(jiang)液5000×g離心 5-10分鐘，取(qu)上清檢測(ce)。

樣本(ben)保存和穩定性

樣(yang)(yang)本在2-8℃條件(jian)下，可以儲(chu)存(cun)72h，或者在- 20℃儲(chu)存(cun)6個月。樣(yang)(yang)本收(shou)集(ji)后，不是一次檢測完，請按一次用量分(fen)(fen)裝凍(dong)存(cun)，避免反復凍(dong)融，使用時在室(shi)溫下解凍(dong)，確保(bao)樣(yang)(yang)品均勻充分(fen)(fen)解凍(dong)。

【檢驗方(fang)法(fa)】

試劑準備

1、使用(yong)前，所(suo)有的組分都要至少(shao)復(fu)溫(wen)30min，確保充分復(fu)溫(wen)到(dao)室(shi)溫(wen)。

2、濃縮洗(xi)(xi)滌(di)液：從冰(bing)箱取(qu)出的濃縮洗(xi)(xi)滌(di)液，會有(you)結晶產生(sheng)，這(zhe)屬于(yu)正常現象，水浴加(jia)熱使結晶溶解。濃縮洗(xi)(xi)滌(di)液與蒸(zheng)餾水，按1:20稀(xi)釋，即1份的濃縮洗(xi)(xi)滌(di)液，添加(jia)19份的蒸(zheng)餾水。

操作程序(xu)

1. 按前面說明書描述的方法(fa)，配制(zhi)好試劑盒各種組分的工作液。

2. 從鋁箔袋中取(qu)出所(suo)需板(ban)條(tiao)，剩余的(de)(de)板(ban)條(tiao)用自封袋密封放(fang)回冰箱。設置標準品(pin)孔、空白孔和樣(yang)(yang)本孔，標準品(pin)孔各加不(bu)同(tong)濃度的(de)(de)標準品(pin)50μL，空白孔不(bu)加，樣(yang)(yang)本孔加待測樣(yang)(yang)本50μL。

3. 除空白孔外，標準(zhun)品孔和(he)樣(yang)本(ben)孔，加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗原100μL。

4. 用封板膜蓋住反應(ying)板，37℃水浴(yu)鍋或恒(heng)溫箱溫育60min。

5. 揭(jie)開(kai)封板膜(mo)，棄(qi)去液(ye)體，吸(xi)水紙(zhi)上拍干(gan)(gan)，每孔加滿(man)洗(xi)滌液(ye)，靜置20S，甩去洗(xi)滌液(ye)，吸(xi)水紙(zhi)上拍干(gan)(gan)，如此重復5次。若(ruo)使用(yong)自動(dong)洗(xi)板機(ji)，請按洗(xi)板機(ji)操作程(cheng)序進行洗(xi)板，添加浸(jin)泡30s的(de)程(cheng)序，可以(yi)提高(gao)檢測(ce)的(de)精度(du)。洗(xi)板結束，加底物前，要在干(gan)(gan)凈不掉屑的(de)紙(zhi)上，充(chong)分(fen)拍干(gan)(gan)反(fan)應(ying)板。

6. 將底物A和B按1:1體(ti)積充(chong)分混合，所有孔中加(jia)入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或(huo)恒溫(wen)箱溫(wen)育15min。

7. 所有孔加入終止(zhi)液50μL，在(zai)450波長的酶標儀上讀取各孔吸(xi)光度（OD值）。

【實驗結果(guo)計算】

檢測完成后，以標(biao)準(zhun)品(pin)濃(nong)度做(zuo)為(wei)縱坐(zuo)標(biao)，對應的吸(xi)(xi)光度（OD值）作為(wei)橫坐(zuo)標(biao)，利用計(ji)算機軟件(jian)，采用四參(can)數Logistic曲線(xian)擬合（4-pl），創建標(biao)準(zhun)曲線(xian)方程(cheng)，通(tong)過樣本的吸(xi)(xi)光度（OD值），利用方程(cheng)計(ji)算樣品(pin)的濃(nong)度值。

如果樣品被稀釋，通過(guo)上(shang)述方法(fa)測的的濃(nong)度(du)值(zhi)，要乘以(yi)稀釋倍數，才是樣品的最終濃(nong)度(du)。

【檢驗方法(fa)的局限性】

1、僅供科研使用，不(bu)得(de)用于臨床診斷。

2、在試劑(ji)盒(he)標示的有(you)效期(qi)內使(shi)用，過期(qi)產品不(bu)得使(shi)用。

3、跟其他(ta)廠(chang)家的試(shi)劑(ji)盒(he)或者組分不能混(hun)用。

4、使用(yong)試劑(ji)盒配套(tao)的樣品稀釋(shi)液。

5、如(ru)果樣(yang)本(ben)值(zhi)高于最(zui)高標準品濃度值(zhi)，請(qing)將樣(yang)本(ben)適(shi)當稀釋后，再重新測(ce)定(ding)。

6、通(tong)過其他方法得到的檢(jian)測結(jie)果，與(yu)本試劑盒測定(ding)結(jie)果不具(ju)有直接的可(ke)比性。

【產品性能(neng)指標】

1. 外觀(guan)和物(wu)理檢查:試(shi)劑(ji)盒應組(zu)分齊全，內外包(bao)裝(zhuang)均應完整，標簽清晰，液體(ti)試(shi)劑(ji)無(wu)滲漏。各組(zu)分裝(zhuang)量不少于表1中要求(qiu)。

2. 線(xian)性(xing): 用四(si)參數(shu)Logistic曲(qu)線(xian)擬(ni)合（4-pl），在1 ng/mL – 16 ng/mL范圍內(nei)，劑量(liang)-反(fan)應曲(qu)線(xian)相關系數(shu)（r）的絕(jue)對(dui)值應不低于0.9900。

3. 精(jing)密度

3.1分析內精密度:試劑盒質控品(pin)測定結(jie)果的(de)變異系數（CV）應不(bu)大于(yu)15.0%。

3.2批(pi)(pi)間精(jing)密度:在三個(ge)不同(tong)批(pi)(pi)次(ci)產品之間，質控品測定結果(guo)的變異系(xi)數（CV）應不大于(yu)15.0%

4.  蕞低檢出限:蕞低檢測濃度小于0.1 ng/mL。

5. 質控(kong)品測定值(zhi): 每次檢(jian)測結果均應在允許范圍內。

【注意(yi)事項】

生(sheng)物(wu)安全

1、檢測必(bi)須符合實驗室管理規(gui)范的規(gui)定，嚴(yan)格防止(zhi)交叉污染(ran)，所有樣品、洗棄(qi)液和各種廢棄(qi)物(wu)都(dou)應按(an)照(zhao)傳(chuan)染(ran)物(wu)進行處置。

2、試劑(ji)盒的液體(ti)組分中(zhong)，含有(you)proclin-300防腐劑(ji)，可能引起皮膚(fu)過敏反應，避免吸入煙霧與皮膚(fu)接觸。

3、底物液(ye)對(dui)皮膚、眼(yan)睛(jing)和(he)上呼(hu)吸道有刺激作用，避免(mian)吸入煙霧。戴上防護(hu)手(shou)套，實驗完成后洗手(shou)。

技術(shu)提示

1、混合蛋白溶(rong)液時，避(bi)免起泡。

2、加校(xiao)準(zhun)品與樣(yang)本時(shi)，每個校(xiao)準(zhun)品濃度和樣(yang)本都要更換移液槍頭，公共組分(fen)應該懸臂加樣(yang)，避免交(jiao)叉污染。

3、合適的溫育時間(jian)，和充分的洗(xi)滌步驟，是(shi)保(bao)證實驗結(jie)果準確性的必要條件。

4、底物(wu)溶液為無色(se)液體(ti)，保存(cun)過程中變為藍色(se)，代(dai)表底物(wu)溶液已(yi)經失效(xiao)，不得使用。

5、終止(zhi)液(ye)(ye)加(jia)樣順(shun)序(xu)(xu)與底(di)物(wu)溶液(ye)(ye)加(jia)樣順(shun)序(xu)(xu)一致，加(jia)入終止(zhi)液(ye)(ye)后，藍色底(di)物(wu)產物(wu)，會(hui)瞬間變為黃(huang)色。

6、實驗(yan)中，用剩的板條，應立即放回自封袋中，密封（低(di)溫干(gan)燥）保存。

7、所有液體組分，使(shi)用前充分搖(yao)勻，嚴格按照說明書(shu)標明的時間(jian)、加樣(yang)量及加樣(yang)順(shun)序進行(xing)溫育操(cao)作。

廢物處理

  所有(you)(you)(you)使用或未使用的(de)試劑，所有(you)(you)(you)污染性的(de)一次性材料，應(ying)當遵循(xun)傳染性或潛在傳染性產品(pin)的(de)處理程序，每(mei)個實(shi)驗室都有(you)(you)(you)責(ze)任根據其實(shi)驗的(de)類型和危(wei)險性級別，進(jin)行廢物和污物的(de)處理，同時要嚴(yan)格依照有(you)(you)(you)關規定對待(dai)所有(you)(you)(you)的(de)廢物和污物。

大鼠孕酮（PROG）ELISA定量檢測試劑盒

南(nan)京億迅生物科技有(you)限公司出品的各類ELISA試劑盒。產品質量穩定，價格實惠，在國內各科研院所和高校擁有良好的品譽。

該類產品還有大鼠白細胞介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒，大鼠白細胞介素4(IL-4)ELISA試劑盒，大鼠白細胞介素5(IL-5)ELISA試劑盒，小鼠沉默調節蛋白1(SIRT1)ELISA試劑盒(he)等。

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