產品名稱：小鼠白細胞介素5（IL-5）ELISA試劑盒

產品(pin)規(gui)格：48T，96T

有效(xiao)期(qi)：6個月

保(bao)存條件：2-8℃

本試劑盒僅供(gong)科(ke)研使(shi)用(yong)，不得用(yong)于臨床診斷

本(ben)試劑盒(he)用于(yu)體(ti)(ti)外定量檢測(ce)血清(qing)、血漿、組織勻漿及(ji)相(xiang)關液體(ti)(ti)樣(yang)本(ben)中小鼠白細胞介素(su)5（IL-5）的(de)含量。

實驗原理：

試劑盒(he)采用(yong)雙抗體(ti)一(yi)步夾心法酶(mei)(mei)聯免疫吸附(fu)試驗（ELISA）。往預先包被小鼠白細(xi)胞介(jie)素5（IL-5）捕獲抗體(ti)的(de)包被微孔中(zhong)，依次加入標本、標準品、HRP標記的(de)檢測(ce)(ce)抗體(ti)，經(jing)過(guo)溫育(yu)并(bing)洗滌(di)。用(yong)底(di)物(wu)TMB顯色，TMB在過(guo)氧化(hua)物(wu)酶(mei)(mei)的(de)催(cui)化(hua)下(xia)(xia)轉(zhuan)化(hua)成藍色，并(bing)在酸的(de)作用(yong)下(xia)(xia)轉(zhuan)化(hua)成最終的(de)黃色。顏色的(de)深淺和樣品中(zhong)的(de)小鼠白細(xi)胞介(jie)素5（IL-5）呈正相(xiang)關(guan)。用(yong)酶(mei)(mei)標儀在450nm 波長下(xia)(xia)測(ce)(ce)定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

樣本處理及(ji)要求(qiu)：

1.  血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2.  血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3.  組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織，剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

4.  細(xi)胞(bao)培養(yang)物(wu)上清(qing)或其它生物(wu)標(biao)本：請1000×g離心20分鐘(zhong)，取上清(qing)即可檢測，或將上清(qing)置于-20℃或-80℃保存，但應(ying)避免(mian)反復凍融(rong)。

注：標本(ben)溶(rong)血會影響最后檢測結果，因此溶(rong)血標本(ben)不宜(yi)進(jin)行此項(xiang)檢測。

需(xu)要而未提供的試劑(ji)和器(qi)材：

1. 酶(mei)標儀（450nm）

2. 高精(jing)度加樣器及槍(qiang)頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒(heng)溫(wen)箱

4. 蒸餾水或去離子水

試劑盒組成：

備注：

1.  標準品(pin)濃度依次為：160、80、40、20、10、5 pg/mL

2.  經(jing)過(guo)(guo)大量正常(chang)標本(ben)檢(jian)(jian)驗(yan)，標本(ben)的(de)正常(chang)濃度(du)值(zhi)均在試劑盒(he)提供(gong)的(de)檢(jian)(jian)測范圍內，實驗(yan)過(guo)(guo)程中直接取50μL樣本(ben)上(shang)樣即可。當有部分樣本(ben)值(zhi)超過(guo)(guo)最大標準品濃度(du)時，可用樣本(ben)-稀釋(shi)液(ye)將標本(ben)進行適(shi)當稀釋(shi)后再(zai)進行實驗(yan)。

注意事項：

1. 嚴格按照(zhao)規定的時間和溫(wen)度(du)進行溫(wen)育以保證準確(que)結果。所有試(shi)劑都必(bi)須在使用(yong)(yong)前(qian)達到室溫(wen)20-25℃。使用(yong)(yong)后立(li)即冷藏(zang)保存(cun)試(shi)劑。

2. 洗(xi)板不(bu)正確可以導致不(bu)準確的結果。在加(jia)入底物(wu)前確保盡量吸干孔(kong)內液體(ti)。溫育過程中不(bu)要讓微孔(kong)干燥掉。

3. 消除板底(di)殘留的液(ye)體(ti)和手指(zhi)印，否則(ze)影響(xiang)OD值(zhi)。

4. 底(di)物(wu)顯色液應(ying)呈無色或很淺(qian)的(de)顏色，已經變藍的(de)底(di)物(wu)液不能使用。

5. 避免試劑和標(biao)本的交(jiao)叉(cha)污染(ran)以免造成錯誤結果。

6. 在儲(chu)存(cun)和溫育時(shi)避免(mian)強光直接照(zhao)射。

7. 平(ping)衡(heng)至(zhi)室溫(wen)后再打開(kai)密(mi)封袋以防(fang)水滴(di)凝(ning)聚在冷(leng)板條上。

8. 任(ren)何反(fan)應試劑(ji)不能接觸漂白溶劑(ji)或漂白溶劑(ji)所(suo)散發的強烈(lie)氣體。任(ren)何漂白成分(fen)都(dou)會破壞試劑(ji)盒中反(fan)應試劑(ji)的生(sheng)物(wu)活性。

9. 不能使用過期(qi)產品。

10. 如(ru)果(guo)可能傳播疾病，所(suo)有的樣品(pin)都(dou)應管理(li)(li)好，按照規定的程序處理(li)(li)樣品(pin)和檢測(ce)裝置。

試劑準備(bei)：

試劑盒從冷藏環境中(zhong)取出應在室(shi)溫平衡(heng)后方可使(shi)用。

20×洗(xi)(xi)滌緩(huan)(huan)沖液的稀釋：蒸餾水按(an)1：20稀釋，即1份(fen)20×洗(xi)(xi)滌緩(huan)(huan)沖液加19份(fen)蒸餾水。

操作步(bu)驟：

1.  從室(shi)溫平衡20min后的鋁箔袋中(zhong)取出(chu)所需板條，剩(sheng)余板條用自封袋密(mi)封放回4℃。

2.  設(she)置標(biao)(biao)準品孔(kong)(kong)和(he)樣本(ben)孔(kong)(kong)，標(biao)(biao)準品孔(kong)(kong)各(ge)加不同濃度的標(biao)(biao)準品50μL；

3.  樣(yang)本孔中加入(ru)待(dai)測樣(yang)本50μL；空白孔不加。

4.  除(chu)空白孔(kong)(kong)外，標準品(pin)孔(kong)(kong)和樣本孔(kong)(kong)中每孔(kong)(kong)加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測(ce)抗體(ti)100μL，用(yong)封板膜封住反應孔(kong)(kong)，37℃水浴(yu)鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去(qu)液體，吸(xi)水紙上拍干，每孔加滿(man)洗滌(di)(di)液（350μL），靜(jing)置1min，甩去(qu)洗滌(di)(di)液，吸(xi)水紙上拍干，如此重復洗板(ban)5次（也可用洗板(ban)機洗板(ban)）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光(guang)孵育(yu)15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內，在(zai)450nm波長處測定各(ge)孔的OD值。

實驗結果計算：

以(yi)所測標(biao)(biao)準品(pin)的(de)OD值為(wei)橫(heng)坐(zuo)標(biao)(biao)，標(biao)(biao)準品(pin)的(de)濃度值為(wei)縱坐(zuo)標(biao)(biao)，在坐(zuo)標(biao)(biao)紙(zhi)上(shang)或用相關(guan)軟(ruan)件(jian)繪制標(biao)(biao)準曲線，并(bing)得到直(zhi)線回歸方(fang)程(cheng)，將樣品(pin)的(de)OD值代(dai)入方(fang)程(cheng)，計算出樣品(pin)的(de)濃度。

試劑盒(he)性能：

1.  檢測(ce)范圍：5 pg/mL – 160 pg/mL。

2.  靈敏度：蕞低檢測濃度小于(yu)1.0 pg/mL。

3.  特異性(xing)：不與其它可溶(rong)性(xing)結構類似物交叉(cha)反應。

4.  重復性(xing)：板(ban)內(nei)變(bian)異系數小(xiao)于10% ，板(ban)間變(bian)異系數小(xiao)于15% 。

說明：

由于現有(you)(you)條件及科學(xue)技術水平尚不能對(dui)所(suo)有(you)(you)供貨商提供的所(suo)有(you)(you)原料進行(xing)全面的鑒定(ding)與分析，本產品可(ke)能存在(zai)一(yi)定(ding)的質量(liang)技術風(feng)險(xian)。

1. 最終的(de)實驗結(jie)果與試劑的(de)有(you)效性、實驗者的(de)相(xiang)關操(cao)作以(yi)及(ji)當(dang)時(shi)的(de)實驗環境(jing)密切相(xiang)關，請(qing)務必(bi)準(zhun)備充足的(de)標(biao)本(ben)備份(fen)。

2. 不同批次(ci)的同一產品可能(neng)會有少許差別，如：檢測限、靈(ling)敏度以(yi)及(ji)顯色(se)時間(jian)等(deng)，請(qing)依(yi)據試劑盒(he)內說(shuo)明(ming)書(shu)進(jin)行實驗操作，網站(zhan)電子版說(shuo)明(ming)書(shu)僅作參考。

3. 只(zhi)有全部使用本試(shi)劑(ji)盒(he)配套試(shi)劑(ji)才能保證檢(jian)測效果(guo)，不能混(hun)用其他(ta)制(zhi)造商的產品。只(zhi)有嚴格遵守本試(shi)劑(ji)盒(he)的實驗說明(ming)才會(hui)得到最(zui)佳的檢(jian)測結(jie)果(guo)。

4. 本公司只對試(shi)劑盒本身負(fu)責，不對因使(shi)用該試(shi)劑盒所造成的樣(yang)本消耗負(fu)責，請使(shi)用者(zhe)使(shi)用前(qian)充分考(kao)慮到樣(yang)本的可能(neng)使(shi)用量(liang)，預留充足的樣(yang)本。

5. 使用化學(xue)裂解液制備(bei)的(de)組織勻(yun)漿或細胞提(ti)取(qu)液可能會由于某些(xie)化學(xue)物質的(de)引入導致ELISA實驗結果偏差。

6. 若(ruo)樣(yang)本為(wei)細胞(bao)培(pei)養上(shang)清(qing)，因該類樣(yang)本干擾因素較(jiao)多，如：細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)、細胞(bao)數(shu)量、采樣(yang)時間等，所以可能存在(zai)檢測不出的情況。

7. 某些天然蛋白(bai)或重組蛋白(bai)，包(bao)括原核及(ji)真核重組蛋白(bai)，可能(neng)因為與本產品所使(shi)用(yong)的檢(jian)測抗體(ti)及(ji)捕獲抗體(ti)不(bu)匹(pi)配，而不(bu)被檢(jian)測出。

小鼠白細胞介素5（IL-5）ELISA試劑盒

南京億迅生(sheng)物科技有限公司出品的各類ELISA試劑盒。產品質量穩定，價格實惠，在國內各科研院所和高校擁有良好的品譽。

該類(lei)產品還有大(da)鼠(shu)白細(xi)胞介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒(he)(he)，大(da)鼠(shu)白細(xi)胞介素4(IL-4)ELISA試劑盒(he)(he)，大(da)鼠(shu)白細(xi)胞介素5(IL-5)ELISA試劑盒(he)(he)，小鼠(shu)沉默調節蛋白1(SIRT1)ELISA試劑盒(he)(he)等。

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