產品名稱(cheng)：小鼠沉默調節蛋白1（SIRT1）ELISA試劑盒

規格：96T，48T

有效期：6個月

保(bao)存條件：2-8℃

本試劑盒僅供科研使用(yong)，不得用(yong)于臨床(chuang)診斷。

本(ben)試(shi)劑(ji)盒用于(yu)體外定量檢(jian)測血清、血漿、組織勻漿及(ji)相關液(ye)體(ti)樣本中(zhong)小鼠沉默調節蛋(dan)白1（SIRT1）的含量(liang)。

實驗原(yuan)理(li)：

試(shi)劑盒(he)采用雙抗(kang)(kang)體(ti)一步夾心法酶(mei)(mei)聯免(mian)疫(yi)吸附試(shi)驗（ELISA）。往預(yu)先包(bao)被小(xiao)鼠沉默(mo)調(diao)節蛋(dan)白(bai)1（SIRT1）捕獲抗(kang)(kang)體(ti)的(de)包(bao)被微(wei)孔中，依次加入標(biao)本、標(biao)準(zhun)品、HRP標(biao)記的(de)檢測(ce)抗(kang)(kang)體(ti)，經過溫育并(bing)洗(xi)滌。用底物(wu)TMB顯色，TMB在(zai)過氧化(hua)物(wu)酶(mei)(mei)的(de)催化(hua)下轉化(hua)成(cheng)藍色，并(bing)在(zai)酸的(de)作用下轉化(hua)成(cheng)最終(zhong)的(de)黃色。顏色的(de)深(shen)淺(qian)和樣品中的(de)小(xiao)鼠沉默(mo)調(diao)節蛋(dan)白(bai)1（SIRT1）呈正相關。用酶(mei)(mei)標(biao)儀在(zai)450nm 波長下測(ce)定吸光度(du)（OD 值），計算樣品濃度(du)。

樣本處理及要求：

1.  血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2.  血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3.  組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織，剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

4.  細胞(bao)培(pei)養物(wu)上清或(huo)(huo)其它生(sheng)物(wu)標本(ben)：請1000×g離心20分(fen)鐘，取(qu)上清即可(ke)檢測，或(huo)(huo)將上清置于-20℃或(huo)(huo)-80℃保存，但應避免反復凍融。

注：標本溶血會影響最(zui)后檢測結果，因此(ci)溶血標本不宜進行此(ci)項檢測。

需(xu)要而未提供的試(shi)劑(ji)和器材(cai)：

1. 酶標儀（450nm）

2. 高精度加(jia)樣器(qi)及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱(xiang)

4. 蒸餾(liu)水(shui)或去離子水(shui)

試劑(ji)盒組成：

備注：

1.  標準品濃度依(yi)次為(wei)：16、8、4、2、1、0.5 ng/mL

2.  經(jing)過大量(liang)正常標(biao)本(ben)(ben)檢驗，標(biao)本(ben)(ben)的正常濃度(du)值均在試(shi)劑盒(he)提供的檢測范圍內，實驗過程中直(zhi)接(jie)取50μL樣(yang)(yang)本(ben)(ben)上(shang)樣(yang)(yang)即可。當(dang)有部分樣(yang)(yang)本(ben)(ben)值超過最大標(biao)準品濃度(du)時，可用樣(yang)(yang)本(ben)(ben)-稀(xi)釋液將標(biao)本(ben)(ben)進(jin)行(xing)適當(dang)稀(xi)釋后再進(jin)行(xing)實驗。

注意(yi)事項：

1. 嚴格按照規定的時間和溫(wen)度進行(xing)溫(wen)育以(yi)保(bao)(bao)證準(zhun)確結果。所有試劑(ji)都必須在使(shi)用前達到室溫(wen)20-25℃。使(shi)用后立即冷藏保(bao)(bao)存試劑(ji)。

2. 洗(xi)板不正確(que)可(ke)以導致不準確(que)的結果。在加入底物前確(que)保盡量吸干孔(kong)內液(ye)體(ti)。溫育過(guo)程中不要讓(rang)微孔(kong)干燥掉。

3. 消除板底殘留的液體(ti)和(he)手指(zhi)印，否(fou)則(ze)影(ying)響OD值。

4. 底物顯色(se)液(ye)應呈無色(se)或很淺的顏色(se)，已經變(bian)藍的底物液(ye)不(bu)能使用。

5. 避免試(shi)劑和(he)標(biao)本(ben)的交(jiao)叉污染以免造成(cheng)錯誤結果。

6. 在(zai)儲存和溫育(yu)時避免(mian)強光直接照射。

7. 平衡(heng)至(zhi)室溫后再(zai)打(da)開密封袋以防水滴凝聚在(zai)冷(leng)板條(tiao)上。

8. 任何(he)反(fan)應試劑(ji)(ji)不能接觸漂白(bai)溶(rong)(rong)劑(ji)(ji)或漂白(bai)溶(rong)(rong)劑(ji)(ji)所散發(fa)的強烈氣體。任何(he)漂白(bai)成分都會破(po)壞試劑(ji)(ji)盒中反(fan)應試劑(ji)(ji)的生物活(huo)性。

9. 不能使用過期產(chan)品(pin)。

10. 如果可能傳(chuan)播疾病，所有的樣品(pin)都應管理(li)好(hao)，按(an)照規定的程序處理(li)樣品(pin)和檢(jian)測(ce)裝置(zhi)。

試劑準(zhun)備：

試劑盒從(cong)冷藏環境中取出應在室溫平衡后方可使用。

20×洗滌(di)緩沖液(ye)的稀(xi)(xi)釋：蒸(zheng)餾(liu)水按1：20稀(xi)(xi)釋，即1份20×洗滌(di)緩沖液(ye)加19份蒸(zheng)餾(liu)水。

操(cao)作步驟：

1.  從室溫平(ping)衡20min后(hou)的鋁箔袋(dai)中取(qu)出所需板(ban)條，剩(sheng)余板(ban)條用(yong)自封(feng)袋(dai)密(mi)封(feng)放回4℃。

2.  設置標準品(pin)(pin)孔和(he)樣(yang)本孔，標準品(pin)(pin)孔各(ge)加不同濃度的標準品(pin)(pin)50μL；

3.  樣(yang)(yang)本孔中加入待測樣(yang)(yang)本50μL；空白(bai)孔不(bu)加。

4.  除空白孔(kong)外，標準品孔(kong)和樣本孔(kong)中(zhong)每孔(kong)加入辣根過氧化(hua)物酶（HRP）標記的檢(jian)測抗體100μL，用封板膜封住反應(ying)孔(kong)，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育(yu)60min。

5.  棄去液體，吸水紙(zhi)上拍干，每孔加滿洗(xi)(xi)滌液（350μL），靜置(zhi)1min，甩去洗(xi)(xi)滌液，吸水紙(zhi)上拍干，如此重復洗(xi)(xi)板(ban)(ban)5次（也可用洗(xi)(xi)板(ban)(ban)機洗(xi)(xi)板(ban)(ban)）。

6.  每孔加入底物A、B各(ge)50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每(mei)孔(kong)加入(ru)終止(zhi)液50μL，15min內，在450nm波(bo)長處(chu)測定各孔(kong)的OD值。

實(shi)驗結果計算：

以所(suo)測標(biao)準品的(de)OD值(zhi)為(wei)橫坐(zuo)標(biao)，標(biao)準品的(de)濃度(du)值(zhi)為(wei)縱(zong)坐(zuo)標(biao)，在(zai)坐(zuo)標(biao)紙上或(huo)用(yong)相關軟件繪(hui)制標(biao)準曲線(xian)，并得到直線(xian)回歸(gui)方(fang)程(cheng)，將樣(yang)品的(de)OD值(zhi)代入方(fang)程(cheng)，計算(suan)出樣(yang)品的(de)濃度(du)。

試劑盒性能(neng)：

1.  檢測范圍：0.5 ng/mL – 16 ng/mL。

2.  靈(ling)敏度：蕞低檢測濃度小于(yu)0.1 ng/mL。

3.  特異性(xing)：不與其它可溶性(xing)結構類似物交叉反應。

4.  重復性：板內變(bian)(bian)異(yi)系數小于(yu)10% ，板間變(bian)(bian)異(yi)系數小于(yu)15% 。

說(shuo)明(ming)：

由于現(xian)有(you)條(tiao)件及科(ke)學技術水平尚不能對所有(you)供(gong)貨(huo)商提供(gong)的所有(you)原料(liao)進行全面的鑒定(ding)與分析，本產品可能存在(zai)一定(ding)的質量(liang)技術風險。

1. 最終的實(shi)驗結(jie)果與試劑的有效性、實(shi)驗者(zhe)的相關(guan)操作以及(ji)當時的實(shi)驗環境密切相關(guan)，請務(wu)必(bi)準(zhun)備充足的標本(ben)備份。

2. 不(bu)同(tong)批次的(de)同(tong)一產(chan)品可(ke)能會有少(shao)許差別(bie)，如：檢測限、靈敏度(du)以(yi)及顯色時間等，請依據(ju)試劑盒內說明書(shu)進行實驗(yan)操作，網站電(dian)子(zi)版說明書(shu)僅作參考(kao)。

3. 只(zhi)有全部使用本試劑(ji)盒配套(tao)試劑(ji)才(cai)能保證檢測效果，不能混用其(qi)他制造商(shang)的產品。只(zhi)有嚴格(ge)遵(zun)守本試劑(ji)盒的實驗說明才(cai)會得(de)到最佳的檢測結果。

4. 本(ben)公司只對(dui)試(shi)劑盒(he)本(ben)身(shen)負責，不對(dui)因(yin)使用該(gai)試(shi)劑盒(he)所造成的(de)樣本(ben)消耗負責，請(qing)使用者使用前充分(fen)考(kao)慮到(dao)樣本(ben)的(de)可(ke)能使用量，預留充足的(de)樣本(ben)。

5. 使用(yong)化學(xue)裂解液制備(bei)的組織(zhi)勻(yun)漿或(huo)細(xi)胞提取液可能會由于某些化學(xue)物質的引入導致ELISA實驗結果偏(pian)差。

6. 若樣本為(wei)細(xi)(xi)胞培養(yang)上清，因(yin)該(gai)類樣本干擾因(yin)素較多(duo)，如：細(xi)(xi)胞狀態、細(xi)(xi)胞數量、采樣時間(jian)等，所以可(ke)能存在檢測不(bu)出的情況。

7. 某(mou)些(xie)天(tian)然蛋(dan)白(bai)(bai)或重組蛋(dan)白(bai)(bai)，包括原核及真核重組蛋(dan)白(bai)(bai)，可能因為與(yu)本(ben)產品所使(shi)用的檢測抗體(ti)(ti)及捕獲抗體(ti)(ti)不(bu)匹配，而不(bu)被(bei)檢測出。

小鼠沉默調節蛋白1（SIRT1）ELISA試劑盒

南京億(yi)迅生物科(ke)技有(you)限公司出品的各類ELISA試劑盒。產品質量穩定，價格實惠，在國內各科研院所和高校擁有良好的品譽。

該類產品還有小鼠聚(ADP核糖)聚合酶1(PARP1)試劑盒，大鼠白細胞介素1β(IL-1β)試劑盒 ，大鼠白細胞介素6(IL-6)試劑盒(he) ，大鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)試(shi)劑(ji)盒，大鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)試劑(ji)盒等。

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